一种三萜雷公藤红素加强TRAIL介导细胞凋亡.docVIP

一种三萜--雷公藤红素--通过下调细胞存活蛋白和上调死亡受体而加强TRAIL-介导的细胞凋亡 BokyungSung,ByoungduckPark,VivekR.Yadav,andBharatB.Aggarwal 来自传统中药的雷公藤红素是三萜类成分，它能否调节TRAIL的抗癌作用，目前正在临床试验中。通过测定质膜完整性，磷脂酰丝氨酸的暴露程度，线粒体的活性， caspase - 8、caspase - 9和caspase – 3的活性，发现雷公藤红素诱发TRAIL-介导的人类乳腺癌细胞的凋亡，并将TRAIL耐药细胞转换成TRAIL敏感的细胞。研究其作用机理时，我们发现，该三萜下调细胞存活蛋白表达包括cFLIP、IAP- 1、BCL -2、Bcl - xL、生存素、XIAP ，上调Bax蛋白表达。此外，我们发现，雷公藤红素同时诱导细胞表面TRAIL受体DR4和DR5表达。在各种癌细胞，包括乳腺癌，肺癌，结肠癌，前列腺癌，食道癌，胰腺癌细胞，髓细胞和白血病细胞中这些受体增加得很明显。死亡受体的基因沉默能消除雷公藤红素对TRAIL-介导细胞凋亡作用的影响。因为CHOP基因沉默消除雷公藤红素对DR5诱导表达作用，同时加强TRAIL-介导的细胞凋亡作用，故三萜类化合物诱导死亡受体是不依赖p53，而是通过诱导CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）。我们发现，雷公藤红素还会诱发活性氧（ROS）的产生，而活性氧的消失会抑制雷公藤红素对CHOP和DR5诱导表达，因而（雷公藤）增强细胞对TRAIL的敏感性。总的来说，我们的结果表明，雷公藤红素可能通过下调细胞存活蛋白和通过ROS介导的CHOP通路上调死亡受体，而上调TRAIL的细胞凋亡作用。 放疗，手术，化疗被认为是癌症治疗的一线方法。放疗和化疗通过几种不同的机制触发肿瘤细胞死亡。然而，这些传统的治疗方法，是有毒的，不是有效的，同时肿瘤逐渐产生耐药性。近年来，有了更多的选择性，肿瘤源性分子的肿瘤生物学驱动因子和靶点的研究，已成为在癌症研究方面的热点。此外，常规化疗与生物制剂相结合，可能会成为更有效的治疗方法。 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）2是TNF超家族（1，2）的成员。因为它优先诱导恶变细胞凋亡，现已引起相当的重视。迄今为止，已确定五个TRAIL受体，其中只有两种胞浆死亡域受体—DR4（TRAIL - R1）和DR5（TRAIL-R2），可参与TRAIL的凋亡机制。一些治疗各种癌症的抗体现在处于的I期或II期临床试验，它通过模仿TRAIL来触发死亡受体介导的细胞凋亡。然而，癌细胞对TRAIL耐受仍然是一个重大的问题。癌细胞为什么或如何产生对TRAIL耐受不完全清楚，但许多机制已经描述，包括死亡受体的改变；结合TRAIL但不产生信号的诱骗受体，如骨素； cFLIP蛋白（caspase - 8的抑制剂）的过度表达， X连锁细胞凋亡的抑制剂（XIAP），Bcl - xL，生存素，MCL-1，核因子NF-κB活化作用。因此，一些可以调节TRAIL耐受的机制的因子，将成为一种潜在的改善细胞因子治疗方法。 雷公藤红素是从中药雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook F）分离出一种三萜，已用于治疗自身免疫性疾病，哮喘，慢性炎症和神经退行性疾病。同时还发现对多种肿瘤细胞有抗癌活性，，包括前列腺癌，白血病，黑色素瘤细胞。雷公藤红素的抗肿瘤作用不仅限于在体外系统中，还发现它能抑制同源和异种移植小鼠模型中黑色素瘤的生长和转移，小鼠体内的人类前列腺肿瘤异种移植，和人脑胶质瘤裸小鼠移植瘤，和在斑马鱼表现抗血管生成的作用。其治疗机制的研究表明，（雷公藤红素）抑制核因子NF-κB信号传导通路和VEGFR表达；抑制热休克蛋白HSP90、ERK和蛋白酶，并激活caspase – 8。 这些因素引起我们证实，雷公藤红素是否可以调节TRAIL诱导细胞凋亡，如果可以的话，通过什么机制。我们发现，雷公藤红素确实可以提高TRAIL诱导细胞凋亡，通过下调各种细胞存活蛋白和上调TRAIL受体。雷公藤红素是通过活性氧（ROS）的产生和CHOP（C / EBP同源蛋白）的表达而上调死亡受体。 实验过程 材料：一个溶剂为100％二甲基亚砜的5mmol/l雷公藤红素溶液（开曼化工），﹣20 °C储存，然后按需要用细胞培养液稀释。可溶性重组人TRAIL/Apo2L是购自PeproTech。青霉素、链霉素、贝科改良Eagle培养基、RPMI 1640和胎牛血清是购自Invitrogen。DR4的抗体、PARP、Bcl-2、cFLIP、BcL- xL、cIAP- 1，Bid、Bax、P53、CHOP、caspase - 3以及procaspase- 8从(圣克鲁斯生物技术)Santa Cruz Bio