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一种从五味子果实中提取的免疫多糖（SCP-IIa） 摘要 一种被命名为SCP-IIa的水溶性多糖，通过乙醇沉淀，去蛋白，阴离子交换和凝胶渗透色谱的手段,能够从五味子果实的水提取物中分离出来。SCP-IIa的分子量是通过高效液相色谱法确定的，免疫调节作用通过使用由环磷酰胺诱导的免疫抑制模型进行评估的。SCP-IIa是一种结构均匀的多糖，平均分子量约为7700Da。检测的参数显示，在免疫抑制小鼠方面，能够增加胸腺和脾脏的指数，以及小鼠腹腔巨噬细胞的胞饮活性。脾细胞增殖实验表明，SCP-IIa与Con A或LPS结合，积极影响脾细胞增殖。此外，多糖促进溶血素的形成。结果表明，SCP-IIa参与免疫调节作用导致SCP-IIa 乙酰水杨酸探索潜在的免疫增强剂。 关键词：多糖；五味子；免疫调节作用；环磷酰胺 介绍 五味子（Turcz.）主要产于中国东北，在东方，它的果实（以下简称五味子）已被广泛用于传统医药和功能食品，长达几千年。五味子有很多传统作用，如收集和阻止放电，补充益气，促进体液的生产，滋阴补肾，平静心态。在中国药典上，它是一种名贵的有着22倍频率的中国传统药物【1】。 在过去的几十年里，研究人员对药用植物作为活性化合物的天然来源的兴趣显著增加，并且对亚洲各种传统的药品的多糖成分也给予了特别的关注【2-4】。最近发现多糖具有多方面的药理行动，包括肝保护，抗氧化和抗衰老和抗癌特性【5-7】。 在最近几年里，运用免疫调节剂来提高宿主防御反应，被认为是一个对于经典的抗生素治疗的最有前途的替代品【8】。从各种传统药用植物中分离出的多糖已被证明，在体内和体外能够深刻地影响免疫系统，通过调节免疫功能的能力，包括细胞因子/趋化因子的生产，活性氧（ROS）的生产，细胞增殖【9】。作为一种免疫调节剂，它具有良好的发展前景，因为它没有显着的副作用，这是一个与免疫调节的细菌多糖和合成化合物相关的重大问题【8,9,10】。 但是，关于五味子多糖（SCP-IIa）的纯化和它对免疫反应的影响相关的公布的数据却很少。在本研究中，我们分离和纯化五味子多糖（SCP-IIa），并且调查五味子多糖（SCP-IIa）治疗小鼠的免疫状态。由于暂时削弱免疫系统是用中草药免疫调节剂治疗的指标，因而我们调查五味子多糖（SCP-IIa）对巨噬细胞功能的影响。用环磷酰胺（Cy）治疗免疫抑制小鼠方面的血清细胞因子和皮细胞增殖的水平是确定五味子多糖（SCP-IIa）是否通过全身的影响发挥其作用，并且探讨五味子多糖（SCP-IIa）在免疫抑制动物方面恢复偏离的免疫参数的程度。 2.材料和方法 2.1 材料 五味子购买于潍坊奔曹戈的中国药品有限公司，并且由徐崇梅教授（制药和生物科学部门,潍坊,潍坊医科大学,中国）验证 SephacrylTM S-200 High Resolution and DEAE-cellulose-52 购自Amersham Biosciences公司。标准葡聚糖T-2000，T-110，T-70，T-40，T-10和循环，得到自Sigma公司（圣圣路易斯，密苏里州，美国）。伴刀豆球蛋白A（刀豆）和脂多糖（LPS）也从Sigma。所有其他试剂均为最高的质量。 2.2一般方法 紫外 - 可见吸收光谱用UNICO UV-2000分光光度计记录。总蛋白质浓度用Lowry等人提出的福林 - 酚通过法进行估计，用牛血清白蛋白作为标准【13】。使用SPECTRA / POR透析管（截留分子量：6000?8000）进行了透析。 2.3多糖的分离和纯化 干五味子粉碎成颗粒（500g），用95％的乙醇脱脂，然后在100?C用5L蒸馏水萃取2小时，并过滤。将残余物用3L水进一步萃取2小时。在减压下，于60?C，用旋转蒸发器将结合水萃取液真空浓缩至500 mL，然后过滤。滤液用Sevag法【14】沉淀五次，并用蒸馏水透析2天。将浓缩的暗棕色溶液通过加入4倍体积的95％乙醇沉淀，并在4?C保持过夜。离心（6000 rpm，20分钟）后，将沉淀物，用无水乙醇洗涤，然后在40?C 溶解在蒸馏水中的SCP（5.0g），被施加到DEAEcellulose柱（2.6厘米×50厘米），并用水和氯化钠（0-0.3mol/L）洗脱。在流速为0.8mL/min的条件下，收集馏分（4mL），并在490nm处使用苯酚 - 硫酸法【15】监测。得到三种馏分（即SCP-I，SCP-II，和SCP-III），SCP-II占产品的53％。 SCP-II 在Sephacryl S-200 HR柱（1.6cm×60cm）中进一步层析，并用 0.1mol/ L的NaCl洗脱。在1.0mL/min的流速下，每次收集2mL的馏分，并按上面方法监测。收集的级分进行透析，并冷冻干燥，得到SCP-IIa，