查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化-细胞生物学专业论文.docxVIP

摘要 查尔酬合酶 (Chalcone syntbase事 CHS) 是类黄商合成途径中的一个关键 酶。 α{S表达量的增加或减少都可能导致模物花色的变异。本实验利用 Rl工，PCR 方法克隆查尔醺合酶基因 (CHS) 的 cDNA暨通过两步的克隆萝构建在植物中 表达 CHS 的植物双元表达载体 p1301B QCo 并以农杆菌介导将 CHS 导入驾萝 中章初步建立了笃萝的遗传转化系统 F 为今后离萝遗传改良的进一步研究奠定 基忘位要结果如下 2 (1) 以即将开放的中国水仙的花蕾为材料，采用异硫氨酸贼一笨盼一氯仿 法提取 RNA，反转录成cDNA 后用特异引物 PCR 扩端出口kb 左右的片段。 核酸序列分析表明萝该片段的渝码区长 1167bp，编码389 个氨基酸。与己知 的植物 CHS 核管酸同源率均达 80%以上，氨基酸同源率高达 85%。实验结果 证明该片段即为中随水仙的 CHScDNA 。 (2) 为了能在在植物中表达 CHS，通过一步的中伺克隆，将 CHS 连上 Camv 3Ss 扇动子和 nos 终正子。进一步将重组片段插入植物表达载体 pCAMBIA1301f 酶切及测序结果都证明植物双元表达载体 p1301BOC 构建获 得成功。 (3) 建立了 萝的基因转化受体系统。在没有前人的工作暴础上啻摸索了 骂萝脱分化和分化的条件 b 实验认为笃萝子叶愈伤组织诱导培养基为 MS哈-BA 0.5 mgIL吃，4心 2m以，曾胚轴愈伤组织诱导培养基为 MS+6-BA 1 m以汁NAAO.5 m胁。愈伤组织分化培养基为 MS+6-BA2m矶。 (4) 初步建立了农杆菌介导的驾萝遗传转化体系，实§金结果表明叶盘法不 适合骂箩的遗传转化。而 GUS 检测表明驾萝的疏松愈伤组织有较高的遗传转 化率。为了进一步验证骂箩的转化，进行了分子检测实验。以载体下 DNA 上 的一段。INA 设计一个引物，以 CHS 上的一段 DNA 为另一个引物啻进行 PCR 检测。同时啻还以 DIG 标记的 Camv 35s 上的一段为探针进行 Southern 点杂交 和… 关键词:查尔翻合酶基因 中国水仙室骂§萝遗传转化 Moleeular Cloning Chaleone Synthase Gene and Studies 00 Genetie Transformation of Quamoc妙pennata by CHS Gene* ABSTRACT Chalcone Syn也ase (CHS)?s a key enzyme in the bios归也:esis of a11 clωses of flavonoids. Increase or decr，创se its e邓lression in plant would change f10wer color. We cloned 伽 cDNA sequence of CHS gene from Narcissus by RT-PCR and constructed plant expression vecωIr p1301B 0 C by one median clone. At the same time，we transfered CHS ω Quamocl伊， penna ，ωby Agrobacterium mediated and established genetic tIansformation system of Quamocliy pennata 也rough the 伊ide ofGl后 report眩 gene. The main results are as below. 1. We ex位acted RNA ftom Narcissus ，cloned the cDNA sequence of CHS gene by RT陀R and analyzed the cωing sequence of gene. 刀le result dem创lstrateS that the sequence of the coding region is 1167bp encodes a protein of 389 amino acid. The homology between Qωmocliy pennala CHSs cDNA and other plants is above 80%，85% between amino acid. In orderωexpress CHS in plant，weω，nstn比例 plant expression vector p 1301B Q C. First added Camv 35s promoter and nos