草鱼3种丙酮酸激酶和α-淀粉酶基因的结构、表达分析和生长相关标记筛选-水产养殖专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 张为民 中山大学 教授 主席 李桂峰 中山大学 教授 委员 喻达辉 中国水产科学研究 院南海水产研究所 研究员 委员 田园园 中国水产科学研究 院珠江水产研究所 助理研究员 秘书 答辩地点 珠江水产研究所 答辩日期 2015-5-29 Sanghai Ocean University Pearl River Fishery Research Institute  Master Dissertation Structure and Expression Analysis of Three Types of Pyruvate Kinase and α- AMY Gene of Grass Carp (Ctenopharyngodon idella) and Screening of SNPs Markers Related to Growth Traits Tang Xiaohong Advisor: Prof. Bai Jun-jie Main field: Fishery Heredity Breeding May, 2015 上海海洋大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本 人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引 用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果 的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法 律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海海洋大学学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。 本人授权上海水产大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密 □ ，在 年解密后适用本版权书。 本学位论文属于 不保密 □ 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 草鱼 3 种丙酮酸激酶和 α-淀粉酶基因的结构、表达分析及生 长相关标记筛选 摘 要 饲料中的糖类物质是成本较低的供能物质，但与哺乳动物相比，鱼类对糖的 利用率是较低的。本研究选取了鱼类糖利用关键酶中的丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK）和 α-淀粉酶（α-amylase，AMY）作为研究对象，分析了 PK 基因和 AMY 基因的 cDNA 序列，组织表达特征以及早期发育的表达谱，并将编码这两种酶的 基因作为筛选草鱼生长相关 SNPs 的候选基因，以期对草鱼饲料中糖类物质的合理 添加量提供一定的指导，同时为草鱼分子标记辅助育种提供更多的标记。具体研 究内容如下： 1. 草鱼三种丙酮酸激酶基因的 cDNA 序列分析、组织表达特征和早期发育的 表达谱。cDNA 序列分析结果显示：草鱼的 PKL 基因 ORF 长 1617bp，编码 538 个氨 基酸；PKMb 基因 ORF 长 1587bp，编码 528 个氨基酸；PK-like 基因 ORF 长 1599bp， 编码 532 个氨基酸。应用实时定量 PCR(real-time PCR)检测了草鱼三种类型的丙酮 酸激酶基因 PKL、PKMb 和 PK-like 在不同组织和早期发育不同时期的相对表达量。 组织表达定量分析结果显示：PKL 主要在肝脏、前肠、中肠和肾脏中表达，PKMb 在肌肉中表达量最高，而 PK-like 在心脏中表达量最高。氨基酸序列同源性比对发 现草鱼的 PKL 和 PKMb 分别与斑马鱼的肝脏型 PK、肌肉 b 型 PK 同源性最高，分 别为 90%和 93%，且主要表达部位相同，关键活性位点与斑马鱼的 L 和肌肉 b 型 均保守,故确定 PKL 与 PKMb 分别为草鱼的肝脏型和肌肉型 PK 同工酶。而 PK-like 与斑马鱼的肌肉 a 型 PK 同源性最高为 95%，但主要表达部位确是心脏，与大鼠的 PKM1 型同源性最高，但关键活性位点却不保守，故 PK-like 的同工酶类型还有待 进一步的验证。 早期发育定量分析结果显示：PKMb 和 PK-like 在未受精卵中就有大量的表达， 而 PKL 从原肠晚期才开始表达，从未受精卵到出膜后 48 小时， PKMb 和 PK-like 的表达量都高于 PKL；而出膜后 72 小时， PKL 的表达量明显上升。推测在草鱼 I 的早期发育阶段，PKMb 和 PK-like 是胚胎仅以卵黄为营养来源即出膜 72 小时开 口摄食之前在糖酵解过程中起主要作用的 PK 同工酶类型，仔鱼开口