藏药“佐太”中重金属汞的蓄积性及长期使用致潜在肾损伤的机制研究-药理学专业论文.docxVIP

成都中 成都中医药大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 藏药“佐太”中重金属汞的蓄积性及长期使 用致潜在肾损伤的机制研究 1 中文摘要 目的 本研究以藏药“佐太”为研究对象，对其长期用药后药物中重金属汞在血液 和肾脏中的蓄积行为及其对肾脏的潜在肾毒性作用进行初步研究，以期揭示藏药 “佐太”可能存在的潜在肾毒性及其作用机制，为藏药“佐太”的安全性机制研 究提供前期基础，为临床安全合理有效地使用“佐太”提供一定的理论依据。 方法 （1）通过最大给药量法分别进行 KM 小鼠和 SD 大鼠的急性毒性试验，初步 探讨藏药“佐太”的安全性； （2）采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS），分别检测给药后 90 天、135 天、180 天及停药 30 天和 120 天后大鼠血液及肾脏中汞（Hg）的含量，考察 Hg 在动物血液中的动态变化规律及其在肾脏中的蓄积行为； （3）通过酶联免疫分析法（ELISA），分别测定给药后 90 天、135 天、180 天及停药后 30 天大鼠血液中血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN），尿液中肾损伤因 子-1（Kim-1）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、视黄醇蛋白（RBP）、β2- 微球蛋白（β2-MG），及肾组织中肾损伤因子-1（Kim-1）、金属硫蛋白（MT）、 谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、 丙二醛（MDA）、超氧化物 歧化酶（SOD）的含量或活性，此外，对停药 120 天后大鼠肾组织中 GSH 含量 进行再次检测，探讨藏药“佐太”长期用药过程中蓄积在动物体内的 Hg 对动物 血液、尿液及肾脏中与肾损伤相关的蛋白或酶水平的影响； （4）采用实时荧光定量法（QRT-PCR），考察给药后 180 天、停药 30 天后， “佐太”对大鼠肾脏中 Kim-1、金属硫蛋白-1（MT-1）、金属硫蛋白-2（MT-2）、 1[课题来源] “十二五”国家科技支撑计划项目（NO.2012BAI27B05-2） I 谷胱甘肽巯基转移酶（GST-pi）及停药 120 天后大鼠肾脏中 GST-pi 的 mRNA 相 对表达量的影响； （5）通过 HE 染色法、免疫组化法、流式细胞仪（Flow Cytometer，FCM） 等方法对给药 90 天、135 天、180 天后及停药 30 后天大鼠肾脏系数、肾组织病 理、肾 Ki67 蛋白表达，肾细胞周期及凋亡率进行检测，考察藏药“佐太”对肾 组织细胞形态学、细胞增殖活性、细胞周期及凋亡率的影响。 结果 （1）藏药“佐太”最大浓度、最大容积分别给 KM 小鼠和 SD 大鼠 1 日内一 次性给药 3g/kg (相当于成人临床每日推荐剂量 0.667mg/kg 的 4498 倍)，连续观 察 14 天，动物外观体征、一般活动正常，饲料消耗量正常，体质量逐步增长， 无明显急性毒性反应，初步表明本品属无明显急性毒性药物； （2）藏药“佐太”连续给药 180 天后，随着给药时间的延长，血汞和肾汞含 量均会随之增加，并存在剂量依赖性；大鼠血中的汞较肾脏中的汞代谢快，停药 后能基本恢复，而肾脏中的汞虽然呈大幅度下降，但仍有较大的残留蓄积，初步 证实“佐太”中汞的主要靶器官是肾脏； （3）藏药“佐太”在连续给药 180 天及停药 30 天后，对各组大鼠血清中 Scr 和 BUN，尿液中 Kim-1、NAG、RBP、β2-MG，肾组织 MDA、SOD 没有明显影 响，但在给药 90 天和 180 天分别造成肾脏中 Kim-1、MT、GSH-Px 和 GSH 水平 的变化，停药 30 天后，除 GSH 活性仍偏高外，其余指标均可逆性恢复，继续停 药至停药 120 天后，GSH 活性也恢复到正常水平。 （4）藏药“佐太”连续给药 180 天后，各给药组 MT-1 mRNA 相对表达量均 显著增加，中、低剂量组 Kim-1、GST-Pi mRNA 相对表达量明显升高，而中、 低剂量组 MT-2 mRNA 相对表达量表现为减少。停药 30 天后，Kim-1、MT-1、 MT-2 mRNA 相对表达量已恢复至与空白对照组比较无明显差异，而 GST-Pi mRNA 相对表达量仍然偏高，推测这是机体的解毒系统对外源性物质刺激所产 生的一种应激解毒表现，继续停药至 120 天后，GST-Pi mRNA 相对表达量基本 恢复，其中低剂量组较给药期间的值出现了明显回调，这可能与机体的多向调控 机制有关，其具体机制有待进一步研究； （5）藏药“佐太”在连续给药 180 天及停药 30 天后，各组大鼠肾脏系数、 II 肾组织病理、肾 Ki67 蛋白表达，肾细胞周期及凋亡率基本没有明显变化，初步 表明 “佐太”对大鼠肾组织细胞形态学、细胞增殖活性、细胞周期及凋亡率的 没有明显影响。 结论 （