组织学实习方法.docVIP

PAGE PAGE 1 一、组织学实习方法 (一)如何正确使用显微镜观察组织标本 1.对照图片，结合实物，熟悉显微镜的构件，掌握显微镜光学部分和机械部分的正确使用方法。 2.将显微镜轻轻地移至观察者的前方，使镜座的前缘距实验台边缘大约5～10公分。 3.旋开显微镜电源开关(显微镜座左后侧转轮)，光线亮度适当。 4.旋转物镜‘转换器’，将10倍物镜旋至镜筒下方，对准‘载物台’中央的孔。 5.打开‘聚光镜孔径光栏’，可见光线经‘集光镜’→‘聚光镜孔径光栏’→‘聚光镜’→‘载物台’中央的孔→10倍物镜→目镜。 6.注意身体坐姿，睁开双眼，把观察注意力集中于显微镜的视场内，可见两个不完全重合的视场光斑，双手推移两目镜，使两光斑合二为一。 7.按照实习指导和切片标本目录，从标本盒内取出要观察的标本，进行肉眼观察，初步了解该标本的大小、形状和染色等。 8.将载玻片放在载物台上，盖玻片朝上，标签位右侧，用弹夹夹好。旋转‘弹夹移动旋钮’，将载玻片上的组织标本移至物镜下方。调节镜座左侧的转轮(即电源开关)，将视野亮度调至适中。在右手旋转‘弹夹移动旋钮’，移动切片的同时，左手慢慢地旋转镜臂下部的大、小‘手轮’聚焦(先旋大手轮后旋小手轮)。做到左、右手配合，双目观察标本。 9.显微观察标本常规是从低倍放大开始，这样视场大，有利于对标本进行全面观察。使用低倍物镜(X10)时，观察者左手转动大手轮，使载物台缓慢上升或下降，同时，观察者用双眼从目镜中观察视场，当见到组织标本像轮廓时，转动小手轮直至组织标本像清晰。 10.当要进一步放大观察时，则直接旋转物镜‘转换器’，将40倍物镜旋至镜筒下方。此时，只需转动小手轮调焦(必要时升降聚光器或调节聚光镜光栏的孔径)，便可获得更清晰的进一步放大的标本像。在不同切片和不同放大倍数下观察时，应注意随时调节亮度，使之最适宜。 11.移动切片观察时，要注意片中组织标本与镜像方位完全相反。二维标本像与其多维的关系，详见切片物像的理解及图示。 12.观察完一张切片后，应回忆总结一下在该片中辨认了几种细胞、组织、结构或该器官的特征性结构，每片如此积累，可以大大提高阅片能力和学习效率。 (二)组织切片制作的一般过程 目的要求 ★ 了解石蜡切片HE染色法的基本过程。 ★ 通过了解切片制作，加深对局部与整体，平面与立体关系的理解。 常用的教学标本是石蜡切片，苏木精(hematoxylin，以H代表)和伊红(eosin，以E代表)染色，即HE染色。现将其制作方法简述于下： 1.取材与固定　取材愈新鲜愈好，材料大小以0.5cm3为宜，放入固定剂内，固定6～24小时。固定的目的是使细胞内的蛋白质凝固，以便保持组织原来的结构和成分。但是，经固定后组织的结构与生活状态下的结构仍有很大差异，可能造成“人工假象”。 常用的固定剂有多种，兹例举两种如下。 (1)10%福尔马林(formalin) 取37～40%甲醛水溶液10毫升，加入水90毫升，即配成10%福尔马林。多用于大块组织的固定，如外科手术取的材料。组织块大小与固定剂体积之比，一般为1∶20。 (2)Bouin液 是一种混合固定剂，取饱和苦味酸水溶液75毫升、37～40%甲醛水溶液25毫升和冰乙酸5毫升，三者混合均匀并过滤。临用前配成。 以含苦味酸的固定剂固定的组织标本，需经70%酒精充分洗涤，尽量除去苦味酸对组织的黄染。 2.脱水 组织标本需包埋在硬的石蜡内才能切成薄片，但是，经固定后的组织内含有水，石蜡不能透入，故需脱水。常用的脱水剂是酒精。为避免组织突然进入无水酒精内产生强烈收缩，需采用升梯度酒精(70%→80%→90%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ)，在不同浓度酒精内的时间长短，则视组织块大小而定。 3.透明 组织标本经酒精脱水后，其内含有酒精，酒精与石蜡仍互不相溶，故组织标本还需进行透明处理。透明是用既能与酒精又能与石蜡溶合的透明剂(常用二甲苯)渗入组织内，完全渗透后，组织呈透明状，即可将组织浸泡在预温、溶化的石蜡内，即浸蜡。 4.包埋 组织标本依次在(60℃的温箱内)软蜡和硬蜡中各浸泡1～2小时。待石蜡充分渗入组织后，将浸有组织的蜡碟从温箱中拿出，等蜡冷却凝固后，即可修块，准备切片。 5.切片 用切片机将包埋有组织的蜡块切成薄片，一般切片厚度为4～7μm。 6.贴片 用适当温度的温水，先将组织片展平，再将它捞在预先涂有粘片剂的载玻片上，放在烤箱内(37℃～45℃)烤干(24h)。 7.染色 在进入染色液之前，组织切片需先用二甲苯脱蜡两次，然后，用纯酒精清除去二甲苯。由于染色液是水溶液，需经下降梯度酒精(100%→95%→85%→80%→70%)，再进入蒸馏水中稍洗 方可入染色液中染色。苏木精碱性染料将细胞核内的染色质和胞质内的核蛋白体等物质染成紫兰色，这种染色特性，称嗜