恩诺沙星化学发光酶免疫分析方法研究-药物分析学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 恩i著沙星(Enrofloxacin ，ENR)是一种氟略诺嗣类药物，广泛应用于兽医的 疾病治疗。但近年来恩诺沙犀应用时所产生的不良反应和耐药性报道越来越多， 其在动物性食品中的残留直接威胁到人挺身体健康。目前常用的兽药残留检测 方法有高效液相色谱法 (HPLC) ，气相色谱法(GC) ，薄层包谱法(TLC)等，这些 方法存在样品前处理繁琐，仪器昂贵等问题因而不易推广。因此研究出…种简 便快速且灵敏的测定 ENR 残留的方法，对于动物性食品兽药残留的检测具有实 际意义。本实验建立了两种不同发光体系的 ENR 化学发光酶免疫分析方法 (chemiluminescence enzyme immunoassay ，CLEIA) ，并进行了实际样品的检测。 1.碱性磷酸酶，金刚炕 (ALP-灿，fiPD)体系 CLEIA 测定 ENR 方法的建立。包 被缓冲液为 0.05 mol/L碳酸盐缓冲液 (CB，pH 9.6)，包被抗体浓度为2μg/mL ， 包被方法为热包被， 37 .C ，150 分钟，采用碳化二亚脏的偶联方法，进析时间 为 6 天，用 0.01 mol/L pH 7.2 的 PBS 缓冲液稀释偶联物，最佳化学发光反应时 间为 8 分钟，发光剂用 CB 缓冲液 1: 4 (V 剧?: Vω) 稀释后每孔加入 25 J.1L。 在最佳检测条件下进行的竞争 CLEIA 检测，得到的 ENR 线性回归方程为 z Y=-0.9961 x+6.6992 ，其中Y 为发光值的对数， x 为相应 ENR 浓度的对数，相关 系数为 0.9977 ，线性范围为3501000 pg/mL ，检测限为239.9 pg/mL ，批内RSD 为 7.33 %9.08 % (n=5)，批问RSD 为 9.52 %-13.28 % (n=匀，标准回收率为 96.3 %103.3 %。 2. 辣根过氧化物酶鲁米诺幽过氧化氧 (HRP-Luminol H202)体系 CLEIA 测定 ENR 方法的建立。包被缓冲液为 0.05 mol/L 碳酸盐缓冲液 (CB，pH 9.6)，包被 抗体浓度为 3μg/mL，包被方法为热包被， 37 .C ，150 分钟，采用碳化工亚肢 的偶联方法，透析时间为 5 天，用 0.01 mol/L pH 7.2 的 PBS 缓冲液稀释偶联物， 封闭温度为 25.C ，封闭时间为2 小时，封闭最为 150μLI孔，最佳免疫反应时间 为 1 小时，免疫反应温度为 37C ，最佳化学发光反应时间为3 分钟，发光剂用 CB 缓冲液 1: 2 (V 制剂: VCB ) 稀释后每孔加入 25μLo 在最佳检测条件下进行 的竞争 CLEIA 检测，得到的 ENR 线性回归方程为: Y=-0.3059x+6.3904，其中Y 为发光值的对数， x 为相应 ENR 浓度的对数，相关系数为 0.9974 ，线性范围在 350--1000pg/mL 之间，检测限为 30.2 pg/mL，批内 RSD 为 7.75%--9.42% (n=5) ， 摘要 批间 RSD 为 9.19%--13.05% (n=匀，标准回收率为 99.9%--100.0% 。 3. 实际样品检测中 CLEIA 法与 HPLC 法、 ELISA 法分析结果的比较，三种 方法的检测限依次为 30勾g/n毡， 6.伽g/mL， 3.6昭他，测定牛奶样品时，二三种 方法分别测定 5 次，其平均回收率依次为 96.7%，88.6%，94.3%，相对标准偏 差依次为 8.27%，3.72% ，10.28%; 测定鸡蛋样品时，三种方法分别测定 5 次， 其平均回收率依次为 97.0% ，90.8% ，94.4%，相对标准偏差依次为 7.98% ，3.13%， 9.40%; 测定蜂蜜样品时，三种方法分别测定 5 次，其平均回收率依次为 97.9% ， %，93.7% ，相对标准偏差依次为8.46%，3.61%，10.07%; 测定血浆样品时， 三种方法分别测定 5 次，其平均回收率依次为 98.2%，86.6%，92.5%，相对标 准偏差依次为 8.99%，4.09% ，8.53%。 关键词z 恩诺沙息化学发光酶免疫分析 实际样品应用 Abstract Abstract Enrofloxacin is a fluoroquinolone drug which is widely used in the treatment of veterinary. In recent years，more and more about enrofloxacin report of adverse rea