二苯乙烯苷对脂多糖诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用及机制研究-药理学专业论文.docxVIP

SDS ELISA DAB Iba1 sodium dodecyl sulphate Enzyme-linked immunosorbent assay diaminobenzidine ionized calcium binding adaptor molecule 1 十二烷基硫酸钠 酶联免疫吸附剂测定 二氨基联苯胺 离子钙结合蛋白 1 二苯乙烯苷对脂多糖诱导的多巴胺能神经元损伤的 保护作用及机制研究 中文摘要 目 的 ： 观 察 二 苯 乙 烯 苷 (tetrahydroxystibene glucoside, TSG) 对 脂 多 糖 （lipopolysaccharide, LPS）诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用，并探讨其可 能机制。 方法： (1)取胎龄 14-15 天的 SD 大鼠胎鼠中脑制备神经元-胶质细胞共培养模 型，实验随机分为空白组、TSG (80 μmol/L) 组、LPS (10 ng/mL) 组、LPS+TSG ( 20 μmol/L) 低剂量组、LPS+TSG (40 μmol/L) 中剂量组、LPS+TSG (80 μmol/L) 高剂量组。药物作用于细胞作用 30 min 后加入 LPS。采用抗酪氨酸羟化酶 （tyrosine hydroxylase, TH）抗体通过免疫细胞化学染色法观察 TSG 对多巴胺能 神经元损伤的保护作用。Griess 试剂和 ELISA 法分别检测共培养上清液中 NO、 TNF-α 和 IL-1β 含量。(2)选取出生 1 天的新生大鼠全脑建立原代小胶质细胞培 养模型，蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测小胶质细胞表面特异性蛋白离 子钙接头蛋白 (ionized calcium-binding adapter molecule-1, Iba-1) 以及 NF-κB 通 路（p65）蛋白的表达水平。(3)单侧黒质注射 LPS (5 ug) 制备大鼠多巴胺能神 经元损伤模型，实验随机分为 5 组：空白组、TSG (50 mg/kg) 组，LPS (5 ug) 组， LPS+TSG (10 mg/kg) 低剂量组，LPS+TSG (50 mg/kg) 高剂量组。大鼠每天腹腔 注射 TSG 连续 7 天，空白组注射同体积生理盐水。采用抗 TH 和抗补体受体-3 （OX-42）抗体通过免疫组织化学染色法分别观察 TSG 对多巴胺能神经损伤的 保护作用及对小胶质细胞激活的抑制作用。 结果：(1)在神经元-胶质细胞共培养模型中，与空白组比较，LPS 组 DA 神经 元数量明显减少，细胞培养上清液中 NO、TNF-α 和 IL-1β 的含量明显升高；与 LPS 组比较，TSG 能够拮抗 LPS 诱导的 DA 神经元损伤，降低细胞培养上清液 中 NO、TNF-α 和 IL-1β 的含量。(2)在原代小胶质细胞培养模型中，与空白组 比较，LPS 组 Iba1 表达明显升高，NF-κB 信号通路被激活；与 LPS 组比较，TSG 能够降低 Iba1 的蛋白表达，抑制 NF-κB 信号通路激活。(3)每天腹腔给予 TSG 连续 7 天，发现 TSG 能够保护中脑黑质直接注射 LPS 诱导的多巴胺能神经元损 伤，并能够抑制小胶质细胞的激活。 结论：TSG 对 LPS 诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用，其作用机制与抑 制小胶质细胞的激活及释放多种炎症介质有关。 关键词：二苯乙烯苷；帕金森病；脂多糖；小胶质细胞；炎性因子 Study on the protective effects and mechanisms of tetrahydroxystibene glucoside on LPS-induced dopaminergic neuronal damage Abstract Objective: To investigate the protective effects of tetrahydroxystibene glucoside (TSG) on lipopolysaccharide (LPS)-induced dopaminergic (DA) neuronal damage in rats. Methods: Primary rat neuron-glia co-cultures were prepared from the ventral midbrain tissues of embryonic day 14-15. The cultures were randomly divided into control, TSG (80 μmol/L), LPS (10 ng/mL) and LPS+TSG ( 20-80 μmo