嘌呤类药物作用及巯基嘌呤甲基转移酶遗传多态性的研究进展..doc

嘌呤类药物作用及巯基嘌呤甲基转移酶遗传多态性的研究进展 目前研究结果表明，治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)的 抗嘌呤代谢药物——6-巯基嘌呤(6-MP)和6-巯代鸟嘌呤 (6-T G)均是无内在生物活性的药物，必须通过体内一系列代 谢后才能发挥抗白血病效应。而人体一种被称为巯基嘌呤甲 基转移酶(TPMT)的代谢酶在此类药物代谢和抗白血病作用 中起关键作用。此酶是存在于哺乳动物和禽类细胞中的一种 细胞内酶，非金属依赖性，能利用S-腺苷-L -甲硫氨酸(SAM) 作为甲基的供体和底物结合，特异地催化杂环类和芳香类化 合物苯环6-位硫原子的甲基化，其内在底物和主要的生物学 功能仍然未完全清楚［1，2］，而其DNA编码顺序上某个核 苷酸碱基点突变，是造成嘌呤类药物不同强度的细胞毒作用 的基础［3］。所以，对于TPMT酶学特点、其遗传多态性的分 子生物学机制以及6-MP、6-TG临床关系的研究成为当前研 究药代动力学的热点之一。 16-MP和6-TG的代谢［4，5］ 6-MP的代谢途径：①由 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT )催化先形成硫基次黄嘌呤 单磷酸盐(T IMP),硫基黄嘌呤单磷酸盐(TXM P)，硫基鸟嘌呤 单磷酸盐(TGMP)，后者经磷酸化后分别形成二磷酸盐和三磷 酸盐。后三种物质统称为TGNs，它整合到肿瘤细胞中影响DNA 的复制及RNA的表达，发挥抗肿瘤作用。②6-MP，TIMP，TGMP 均可由TPMT催化生成甲基化的衍生物6-meMP, 6-meTGMP，6-meTIMP，这些甲基化的化合物属于“无活性”的 物质，它们能够抑制磷酸核糖焦磷酸化氨基转移酶(PRPP-AT) 的活性，后者是细胞重新合成嘌呤步骤中的关键酶，因此，抑 制PRPP-AT的活性就阻断了肿瘤细胞遗传信息的表达，从而 达到抗白血病的作用。③由黄嘌呤氧化酶催化形成6-硫基黄 嘌呤后再形成尿酸也可生成尿酸排出。 6-TG的代谢途径：①由HPRT催化直接形成硫基鸟嘌呤 磷酸化合物(TGNs)发挥抗白血病作用。②也可由TPMP催化 生成甲基化的产物如6 -meTG，或me-TGMP，达到抗肿瘤的作用。 但组织中TPMP对6-TG的催化效力远比6-MP低(约为1/12) ［4］，故此过程并非6-TG的主要代谢途径。③6-TG由鸟嘌 呤脱氢酶催化生成6-硫基黄嘌呤再由黄嘌呤氧化酶催化生 成尿酸排出。 2TPMT的酶学特点 TPMT的组成结构：由两个具有相同的催化功能单体组成， 说明TPMT的结构并非引起遗传多态性的原因。TPMT的分子 量大约为30000。通过提取和分析人肾脏组织中的TPMT，发 现它由245个氨基酸残基组成。另有人还发现几乎每个依赖 SAM的甲基转移酶均含有3个结构保守的序列(moti f I , II, III),分别含24-，12-，12-三个单体结构，估计这些序列为酶 结合底物的结构域［6?8］。 TP MT的组织分布：人类TPMT首先在肝脏、肾脏中被发 现，随后陆续地在胃肠道、肺、脑、血液、胎儿、胎盘等组 织中发现。成年人肝细胞的TPMT浓度和血液组织中几乎呈 直线相关。第3个月的胎儿即有TPMT的存在，其中第6个月 的浓度及活性和新生儿类似，说明TPMT的浓度及活性在人体 各组织内，甚至肿瘤组织中均存在密切相关性，测定红细胞 中的TPMT浓度即可大致估计其它组织的酶活性［9,10］。 TPMT的酶学动力学特征：酶活性随孵育时间、底物浓度、 pH值和离子浓度、底物浓度（红细胞浓度）的变化而变化［11］。 TPMT最佳孵育时间为60分钟［10］，其它参数符合 Michaelis-ment en 曲线。同时，Krynetski 等［11］发现在 一般组织中（肝、肾等）酶作用最佳pH值为，而血液中为。 T PMT的鹿物及抑制物：Krynets ki等做了 18种6-MP 和6-TG衍生物的酶学实验，包括它们的核苷酸和核糖核酸， 描述了它们的反应特性：大多数的衍生物均可作为TPMT的 底物，它们的酶促动力学特性均符合Michael is-menten曲线， 发现6-MP比6-TG与酶结合的能力强。在所有前体药物 （6-MP，6-TG）和衍生物中，8-羟基-6-MP和6-TG分别是两个药 物家系中活性最大者，而它们的核苷酸盐类则是这些化合物 中活性最低的，其原因可能是它们较易被水解。Mcleod等［10］ 发现当化合物中7,9位被烷基化后，其与酶结合的能力有所 加强。同时发现前体药物的Km、Vm和K m/Vm值均比其衍生 物低，说明6-MP和6-TG并非TPMT的自然底物。另外，6-硒基11 票呤(Selenopu rine)及其衍生物也可以作为TPM T的底物，但是它们的Km和Vm值均显著比硫基嘌呤及其衍生物低。黄嘌呤8位上有-0H基