苏云金杆菌！#！$基因克隆、表达和杀虫活性分析.PDFVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 $%%$ !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *’+,-.,/ $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 苏云金杆菌 !# !$ 基因的克隆、表达及杀虫活性分析 陈建武 唐丽霞 汤慕瑾 师永霞 庞 义 （中山大学生物防治国家重点实验室 广州 J!%$:J ） 摘 要 用全长 方法从野生型苏云金杆菌（ ， ）菌株 中克隆了 大小的 基 KLM .+0#,,) /)*#$1#%$# GN E!5 $ O2 H. 3#4 25 因并进行了序列分析。将 3#4 25 0E!5 基因插入表达载体PQ;2% 构建了表达质粒PR6K，转化大肠杆菌S!J，转化子 经!--’(T = UK6F 诱导后可表达1 HV 大小的P240E!5 蛋白，并得到W,N,/D .(’N 证实。蛋白可溶性试验表明，目的 蛋白中约有!1 X 是可溶的，用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此，可以在自然条件下进行 目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体，用于苏云金杆菌P24 蛋白表达的检测。利用UK6F 进行诱导 培养的菌液对甜菜夜蛾（ ）、斜纹夜蛾（ ）和棉铃虫（ ）等 种害虫的初孵幼 64(7(4/%*+ %8#1)+ 6 ) ,#/)*+ 9%,#0(3%*4 + +*:#1%*+ 2 虫进行生物测定，结果表明， 蛋白对夜蛾科害虫具有较高的杀虫活性。 P240E!5 关键词 苏云金杆菌， 基因，克隆，表达，抗体 3#4 25 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） Q:1 4 !%%%02%#! $%%$ %#0%#:0%# 苏云金杆菌（ ， ）是世界上 基因研究的报道。 .+0#,,) /)*#$1#%$# GN 应用面积最广、研究最为深入的杀虫微生物，它能够 材料与方法 在芽孢期形成由杀虫晶体蛋白（ UD,CNCB8( L/YN8( ， ）组成的伴孢晶体， 本身对昆虫不 # 主要试剂、质粒及菌种 K/’N,D ULK ULK 显示毒性，需经昆虫肠液酶消化或酶解成毒素才引 V*4 -8/H,/ 和PF;S06 ;8Y 载体系统购自K/’0 ［，］ 起昆虫死亡! $ 。但是， 也存在杀虫谱窄、毒力不 -,[8 公司；限制酶均购自68\8M8 公司；高保真KLM GN ［，］ 试剂盒购自 公司； 高效表达及纯化试