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穿心莲内酯高压液相色谱纯化技术的研究 　　摘要：以穿心莲提取物为试验原料，采用动态轴向压缩制备色谱技术进行分离纯化，以制备高纯度穿心莲内酯。制备柱装填纯化材料：硅胶基质C18 10 μm，装填质量300 g，实测柱床规格50 mm×250 mm。以甲醇水为流动相进行纯化工艺优化，结果表明，甲醇水体系下水相添加005 molL乙酸铵能促进穿心莲内酯的溶解，该体系下穿心莲内酯最佳纯化工艺条件：流动相55%甲醇水+45% 005 molL乙酸铵缓冲液，流速600 mLmin；检测波长254 nm，温度为室温。 　　关键词：穿心莲内酯；分离纯化；制备色谱；工艺优化 　　中图分类号： R2842文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）21-0202-03 　　收稿日期：2016-05-25 　　基金项目：江苏省自然科学基金青年基金（编号；江苏大学高级人才科研启动基金（编号：15JDG070）。 　　作者简介：孙宝胜（1983―），男，山东菏泽人，硕士，助理工程师，主要从事药食同源植物活性成分提取分离技术以及功能活性评价研究。Tel：（0523E-mail：s_baosheng@163com。 　　通信作者：吴本刚，博士研究生，讲师，主要从事食品功能成分提取及其活性评价研究。Tel：（0511E-mail：wubg@ujseducn。 　　穿心莲Andrographis paniculata（Burm f） Nees]为爵床科（Acanthaceae）穿心莲属（Andrographis Wall ex Nees）植物，别称一见喜、苦草、四方草、印度草等1]，在中国、印度、马来西亚等国具有悠久的民间药用史，在国内主要分布在广东省、广西壮族自治区、福建省、四川省等省（区），以广西壮族自治区种植面积最大2]。 　　穿心莲植株所含穿心莲内酯是目前穿心莲制剂的主要活性成分3]，其分子式为C20H30O5，在穿心莲叶中含量高达 184%。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗炎抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管疾病、保肝利胆、抗肿瘤等作用，具有毒性小、价格低的特点。穿心莲具有清热解毒、凉血、消肿等功效，在临床上用于治疗呼吸道感染、急性菌痢、肠胃炎等疾病4-5]，还具有防治心血管疾病、抗肿瘤、保肝利胆、免疫调节等多重功效6-7]，在我国已作为穿虎宁、穿心莲注射液等解热镇痛药的原料大量生产8-9]。 　　穿心莲内酯提取主要采用乙醇直接提取法、水提法、超声波?o助提取法、酶解辅助提取法等方法，在此基础上进一步采用大孔树脂吸附和结晶等方法进一步纯化10]。范云鸽等采用ADS-7树脂对传统的乙醇回流提取液进行纯化，分离干燥后得到的浸膏中穿心莲内酯含量达253%11]。本试验原料为穿心莲经乙醇水提取、大孔树脂纯化后粗品，在此基础上采用反相高压液相色谱对其进一步纯化，优化工艺条件以获得高纯度的产品，旨在为穿心莲内酯的精制提供工艺参考。 　　1材料与方法 　　11试剂 　　甲醇（AR），国药集团化学试剂有限公司生产；娃哈哈牌饮用纯净水，自制去离子水；乙酸铵（AR），国药集团化学试剂有限公司生产；9958%穿心莲内酯对照品，46%穿心莲内酯乙醇水粗提物。 　　12仪器及设备 　　Waters 2695―2998高效液相色谱仪；Waters Sunfire C18 5 μm 46 mm×250 mm色谱柱，柱恒温箱；创新牌制备型50DAC液相色谱仪；装填普通C18填料色谱柱300 g，实测柱床高度250 mm，柱床直径50 mm；万分之一分析天平（赛多利斯公司）；超声波清洗机。 　　13试验方法 　　131标准曲线建立 　　标准曲线测试液相方法：Waters 2695―2998高效液相色谱仪，Sunfire C18 46 mm×250 mm柱，流动相甲醇 ∶水=55 ∶45，水相中含有01%乙酸，进样体积5 μL，柱温度25 ℃，流速1 mLmin，以质量浓度为横坐标和峰面积为纵坐标作标准曲线。 　　准确称取0010 0 g纯度9958%对照品，用甲醇定容至50 mL，超声混匀，配制020 mgmL标准液，依次稀释得到 020、010、006、004、002 mgmL梯度标准溶液，进Waters液相测试，鉴于该物质溶解度较低，故采取增大进样体积方式增大进样量，分别进样10 μL和15 μL作为 04 mgmL 和06 mgmL浓度标准曲线点。 　　132甲醇水流动相体系下保留时间优化 　　为考察穿心莲内酯在该C18柱甲醇水体系下的保留性能，用穿心莲对照品做试验样品考察合适该物质的甲醇比例。试验初始条件：流速600 mLmin，定量环进样3