教育论文类风湿关节炎动物模型的研究进展.docVIP

类风湿关节炎动物模型的研究进展 类风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身 免疫性疾病。研究此类疾病的有效方法是建立动物模型。但是不同的 动物模型有着不同的特点，应根据不同的实验要求来选择正确的动物 模型。 关键词：类风湿性关节炎；发病机制；动物模型 类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis）是一种以关节滑膜炎 为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。滑膜炎持久反复发作，可导致 关节内软骨和骨的破坏，关节功能障碍，甚至残废。 类风湿性关节炎的动物模型有多种，本文将对集中关节炎模型的 发病机制、制备方法、造模特点等方面进行研究。 1卵蛋白诱导的关节炎模型 1.1卵蛋白关节炎模型的制备 （1）试剂的制备:将鸡卵蛋白用无 菌生理盐水配置成浓度为20mg/ml的溶液，与同体积的弗氏完全佐剂 混匀，完全乳化，滴于冰水上5至10分钟内完全不扩散为合格。（2） 致敏及检测：驱上述乳化液1ml在动物背部皮下分5个部位皮下注射， 第2周及第4周分别用相同的方法加免疫一次。（3）检测：第6周取 鸡卵蛋白溶液0.1ml （10微克）在动物后臀皮下注射，20h-48h内皮试 呈阳性反应（产生至少16mm的皮肤红色隆起）为致敏成功。（3）关节 炎模型的诱发：在动物的胫骨节最高点与髌骨下缘连线之中点的髌韧 带两侧，且垂直于皮肤注射0.5ml鸡卵蛋白溶液(含鸡卵蛋白5mg)。 1.2卵蛋白关节炎的发病机制卵蛋白诱导的关节炎模型的病理改 变有滑膜增生、血管翳形成、软骨及骨破坏。关节注入抗原后24h出 现关节肿胀，病理表现为急性滑膜炎，大量渗出液。诱导1周后，模 型组织学观察可见滑膜衬里层细胞的增多，衬里下层炎性细胞侵润及 纤维素样变性坏死［1］。1-4周后，关节滑膜明显增生，血管翳形成，滑 膜细胞由1-3层增至6-10层，以单核细胞和巨噬细胞为主，其次为淋 巴细胞。4周后出现不可逆的关节软骨和骨破坏，有软骨细胞的坏死、 软骨下新骨形成、软骨纤维化，最后可出现股病变。Trauner*：21的研 究表明，卵蛋白诱导的关节炎模型的发病机制主要是由于关节内抗原 的持续存在，刺激滑膜细胞分泌抗体，形成抗原-抗体-C3复合物，使 滑膜炎持续存在，滑膜增生，血管翳形成。 2 佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis)模型 佐剂性关节炎，又称弗氏佐剂性关节炎，是研究免疫性关节炎动物 模型的基本方法［3］［4］。弗氏佐剂性关节炎分为完全佐剂(CFA)和不完 全佐剂(IFA)。完全佐剂是用液体石蜡与无水羊毛脂按2: 1或者6: 4的比例混合液lml,高压灭菌加入80°C灭活lh的减毒卡介苗或者干 燥结核死菌lOing制成。不加卡介苗的为不完全佐剂。 1.1佐剂性关节炎模型的制备：配制成弗氏完全佐剂(CFA)，大鼠右足 垫皮内注射(0.05 ml/只)致敏大鼠，原发病变表现为致炎侧的关节肿 胀，致敏后即可出现，继发病变一般于致炎12?14 d后出现，表现为 非致炎侧及双前肢的关节肿胀。 1.2佐剂性关节炎的发病机制：佐剂性关节炎的发病机制主要是分子 模拟理论：结核杆菌的一个蛋白分子与关节滑膜上的一个糖蛋白分子 结构相似，可以被同一株T细胞克隆所识别，从而诱发残生针对关节 的免疫反应。 1.3佐剂性关节炎模型的特点：佐剂性关节炎的炎症以踝关节为重， 可侵及足垫、全足。［5］佐剂性关节炎大鼠模型的制作方法简单，易于 制作，其病理表现与类风湿性关节炎相似，但其病变有一定的自限性， 与类风湿性关节炎的病理生理学特点存在较大差别。因此单独使用佐 剂性关节炎模型作为研究类风湿性关节炎的模型，有一定的局限性。 3 胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型 Trentham等首次发现50%的RA患者血清中存在有抗II型胶原的自身 抗体。Foidartdeng［6］则报道，多发性软骨炎患者体内具有抗天然II 型胶原的抗体。II型胶原诱导的关节炎模型是Trentham等［7］.于1977 年创立的，将纯化的天然胶原溶于0. lmol/L醋酸，制成质量浓度为 lg/L的溶液，与等量的弗氏佐剂或IFA混合而成的稳定乳剂。II型 胶原是目前较为公认的关节软骨特异性抗原［8］。 3.1胶原诱导性关节炎模型的制备（大鼠）：将II型胶原用0. lmol/ml 的冰醋酸溶解后配成2g/L的溶液，加等体积的不完全佐剂（IFA）， 使终质量浓度为lg/L。大鼠背部剃毛，自鼠尾部开始，分5-6个部位 皮内注射，每个部位0.1ml。7d后加强免疫注射一次，建立胶原诱导 的大鼠实验模型。动物致敏后7d，部分大鼠出现踝关节皮肤发红，肿 胀；14d后部分大鼠出现踝关节肿胀，足部充血，活动受限。 系列实验研究表明［9_12］。动物致敏7d后，不分大鼠的