抗红鳍东方皮肤溃烂病病原哈维弧菌单克隆抗体的制备及特性分析.docVIP

抗红鳍东方皮肤溃烂病病原哈维弧菌单克隆抗体的制备及特性分析 以红鳍东方?皮肤溃烂病病原一一哈维弧 菌2SYX002为抗原，通过杂交瘤技术制备了抗哈维弧 的单抗 1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、2E7、4A7、 5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、4D12、2B9、7D6、 6E6、1G2、6G6和2C1。特性分析结果表明：有8 株单克隆抗体（1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、7D6、 6E6、6G6）特异性较差，与试验中所有菌株均发生反 应；有 6 株（4A7、4E12、7D7、8E10、4D12、2B9） 只与免疫菌株哈维弧菌2SYX002反应，与其他菌株均 不发生反应。5株单抗（2E7、5B2、1G2、2C1、1G3 ） 与部分参考菌株有不同程度交叉反应；通过进一步特 性分析，从中筛选出单克隆抗体2C1，其抗原包被浓 度为5 X 107 cells/mL时，与试验中所有哈维弧菌分离 株反应均为阳性，除溶藻弧菌外不与其他参考菌株发 生交叉反应，效价为1: 256。本研究扩充了哈维弧菌 单克隆抗体库，为哈维弧菌单克隆抗体的进一步应用 提供参考数据。 关键词哈维弧菌；红鰭东方?；单克隆抗体；特 性分析 S941.4 A 1007-5739 (2016) 08-0239-01 Abstract In this paper， 6-week-old BALB/c mice were immunized with Vibrio harveyi 2SYX002 (isolated from dermal ulcer of Fugu rubripes) for monoclonal antibody preparation. After cell fusion，， screening, sub-cell clone， and so on， 19 hybridoma cell lines were obtained and named (1B6、1D6、1A4、 5B4、6C6、2E7、4A7、5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、 4D12、2B9、7D6、6E6、1G2、6G6 and 2C1) .ELISA results showed that the MAb 1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、 7D6、6E6 and 6G6 had positive reaction with all of the standard and isolated strains.The mAb of 4A7、4E12 7D7、8E10、4D12 and 2B9 had no crossreaction with other 11 standard bacterial strains，only specific reaction with the immuned bactria. MAb 2E7、5B2,、1G2,、2C1 and 1G3 had cross-reacted with tested strains， such as Vibrio.parahaemolyticus， Vibrio.damsela and so on. Among them，MAb 2C1 only had positive reaction with all strains of Vibrio.harveyi and Vibrio.alginolyticus (the titer was 1: 256), without other 11 standard bacterialstrains. The present results provided the basis for the preparation of immunochromatographic test strip to rapid detection Vibrio, harveyi. Key words Vibrio harveyi ； Fugu rubripes； monoclonal antibodies ； characteristic analysis. 哈维弧菌(Vibrio harveyi)又称哈氏弧菌，广泛 存在于海洋环境中，是海水养殖业中一种常见的致病 菌。其宿主十分广泛，是对虾发光病的主要致病菌 ［1-2］,还可引起多种海水养殖鱼类溃疡病［3-5］，其中 红鰭东方?皮肤溃烂病，具有传染性较强，死亡率较高 的特点。哈维弧菌是该病主要病原菌之一，患病鱼体 出现表皮溃烂，伴随全身性出血，病灶处肌肉组织严 重液化，肝脏等器官严重损伤，给养殖业带来严重的 经济损失。由于哈维弧菌遗传特征和生理生化特征复 杂多样，并且与其近缘种在表型上有很高的相似性， 依靠传统