常见的_食品中大肠菌群的测定.ppt

? （3） 平板菌落数的选择 选取菌落数在15-150 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。 2、 平板计数 ? （4）、 证实试验 从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36℃±1℃ 培养24h-48h ，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。 2、 平板计数 ?（5）大肠菌群平板计数的报告 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以（3）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。 2、 平板计数 例：10-4样品稀释液1 mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取 其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105 CFU/g（mL）。 国标4789.3的08版与03版主要不同 1、名称更改 以大肠菌群计数代替原来的大肠菌群测定。 2、增加了大肠菌群的平板计数法和纸片检测法。 3、大肠菌群的MPN法以乳糖为主改为以月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤为主的要培养基的MPN法。 4、大肠菌群的MPN法中原“报告每100 ml （或g）大肠菌群的MPN值”改为“报告每1 ml （或1g）大肠菌群的MPN值”。 比较区别 GB/T4789.38 -- 2008大肠杆菌的计数 03版??流程  一、??步骤 取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成1:10的均匀稀释液为检样。 同一稀释度在做菌落总数测定的同时接种乳糖胆盐发酵管，并且用大肠埃希氏菌、产气肠杆菌混合菌种作对照 。 1、乳糖发酵试验  根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。 接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。 置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。  2?、分离培养  将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置36±1℃温箱内，培养18～24小时后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。 可疑菌落特点： 具有金属光泽的深紫黑色菌落； 不带或略带金属光泽的菌落； 中心色较深的淡紫黑色菌落。 3?、证实试验  在上述平板上挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱培养24±2小时,观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。 4?、报告  根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 二、结果????根据证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表(见附录)报告每100ml(克)大肠菌群的最可能数。 三、注意事项 1、第一步乳糖胆盐发酵试验是样品的发酵结果，不是纯菌的发酵试验，初发酵阳性管，经过后两步，有可能成为阴性。只做一步，会有相当多的合格样品作为不合格处理，应注意。 2、胆盐可抑制革兰氏阳性菌的生长，有利于大肠杆菌的生长繁殖。 3、接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。 4、大肠菌群菌落在EMB琼脂上大多呈紫黑色有金属光泽或无金属光泽。应取典型菌落，如无应多取几个菌落，以免出现假阳性。 一般平板上有较多的大肠杆菌典型菌落，且革兰氏染色为阴性，可做出判定。 5、对初发酵时未产气的发酵管有疑问时，可用手轻轻敲动或摇动试管，如有气泡沿管壁上升，应考虑有气体产生，做进一步试验。 6、 MPN检索表是采用三个稀释度九管法，较理想的结果是最低3管为阳性，最高3管为阴性。如无法估测样品中的菌数时，应做一定范围的稀释度。 7、 MPN检索表只提供了3个稀释度，若改用其它浓度时，表内数字应相应增加或减少。 酱油（GB/T2717-2003） 细菌菌落总数： ≤30000cfu/ml 大肠菌群： ≤30MPN/100ml 肠道致病菌： 不得检出 全脂奶粉、脱脂奶粉（GB5410-1999） 特级 一级