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银合欢组织培养的研究初报 　　摘要：以银合欢（Leucaena leucocephIa（Lamarck）de wit）无菌实生苗子叶和胚轴切段为外植体，以MS为基本培养基，研究不同BA和NAA浓度组合对银合欢组织培养效果的影响。结果表明：愈伤组织诱导培养中，以子叶的培养反应性最好，其愈伤组织诱导率在各种组合中都达到100%，其中以附加0.1mg/LNAA和2.5-7.0mg/LBA效果最好；胚轴在添加0.1mg/LNAA及3.0-4.5mg/LBA的MS培养基上培养时愈伤组织诱导率较高。子叶愈伤组织在MS+3.0mg/L BA+0.2mg/LNAA的培养基中培养时芽分化率只有6.7%；胚轴愈伤组织则未能实现芽的分化。 　　关键词：银合欢；无菌萌发；组织培养；愈伤组织 　　中图分类号：Q813.12 　　银合欢（Leucaena leucocephla（Lamarck）de Wit）为豆科（Leguminosae）含羞草亚科（Mimosoideae）银合欢属（Leucaena Bentham）多年生灌木或乔木，别名白相思子、细叶番婆树、臭菁仔，原产于美洲，现广泛分布于世界热带亚热带地区。银合欢生长快，适应性强（适应温带、亚热带乃至热带气温），对土壤无苛求，耐干旱瘠薄，根系发达，在近地表层的根系上着生许多根瘤，可固定空气中总的游离氮，对绿化荒山、保持水土、提高土壤肥力有重要作用。因此，银合欢可作为荒山绿化的先锋树种，是优秀的水土保持植物。此外，银合欢萌生力强，速生高产，其树干材质优良，可作木材、胶合板、造纸原料：又是能源树种，可作薪材。更重要的是，银合欢鲜嫩茎叶年产量达37-60t/hm2，叶片干物质中粗蛋白质含量达22%-29%，含有丰富的蛋白质、脂肪、矿物质、氨基酸、胡萝卜素、多种维生素和微量元素，适口性好，是理想的蛋白饲料，被誉为“奇迹树”，还被联合国粮农组织的饲料专家誉为干旱地区的“蛋白质仓库”，但种子、枝叶均含有毒的含羞草素，若利用不当则会对畜禽有害。银合欢是联合国粮农组织向亚太地区推广的多用途优良树种之一。 　　对银合欢进行组织培养研究，除有望对银合欢进行大规模快速繁殖和人工种子研制外，还可在植物组织培养的基础上，对银合欢进行生物技术育种，尤其是银合欢种子、叶片和根系等器官中含有含羞草素，对非反刍动物和瘤胃无降解银合欢能力的反刍动物均有毒，如果能利用基因工程技术减少甚至完全抑制毒素的产生，其作为饲料的利用价值将会更大。前人的研究中曾有关于银合欢芽或带芽茎段组织培养的报道，但目前尚未见关于银合欢其他外植体组织培养的报道。本研究以银合欢无菌实生苗子叶和胚轴为材料进行组织培养的初步研究。 　　1.材料与方法 　　1.1材料 　　银合欢种子由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所提供。 　　1.2方法 　　1.2.1种子的无菌萌发 　　由于银合欢种皮坚硬，不易萌发，因此将种子置于不同温度的水中进行预处理，以促进种子萌发。经预处理后用纱布将种子包裹起来进行消毒，先用75%酒精表面消毒1min，再用0.1%升汞灭菌15min，随后用无菌水洗4-5次：在超净工作台上将种子接种于不含任何生长调节物质的MS培养基（附加30g/L蔗糖和0.7%琼脂），每瓶接3-4颗种子：萌发培养1周后取下子叶和下胚轴，以其为外植体进行组织培养。 　　1.2.2子叶和胚轴培养 　　将无菌萌发的银合欢实生苗子叶切成约5mm2大小，胚轴切成0.5cm左右的片段，分别接种于附加不同浓度BA和NAA的MS培养基上进行愈伤组织诱导培养。每个组合接种60个以上的外植体，1个月后进行观察统计。之后进行愈伤组织分化培养，分化培养基中添加不同浓度组合的BA和NAA，以此进行配比试验。每个组合接种60个以上的愈伤组织，所有的培养基都附加30g/L蔗糖和0.7%琼脂。 　　1.2.3培养基准备和培养条件 　　培养基在灭菌前将pH调为5.8，经121℃高温高压灭菌20min，待其冷却后用于接种。在变温条件下培养，昼夜温度分别为25、18℃，白天用日光灯补充光照12h，光强为2000-300lx。 　　2.结果与分析 　　2.1不同温度的水处理对银合欢种子无菌萌发的影响 　　不同处理方法对银合欢种子无菌萌发的影响见表1。在不同温度的水处理中，温度越高，萌发率越低，沸水煮8min甚至没有一粒种子萌发。其中，以60℃温水泡8min时发芽率最高，可达55.0%：而用冷水浸泡10min时发芽率仅为20.0%。经处理后的种子表面消毒比较彻底，污染率基本为0。 　　2.2不同BA和NAA浓度配比对银合欢子叶和胚轴愈伤组织诱导的影响 　　在预备试验中，单独附加NAA的培养基上，银合欢子叶和胚轴愈伤组织诱导率极低，因此以不同浓度的BA与低浓度的NAA配比