铅离子诱导PS2.M构象改变特性及其氡非标记比色传感检测新的方法.docVIP

铅离子诱导PS2.M构象改变特性及其氡非标记比色传感检测新的方法 　　摘 要 以氡辐射衰变最终形成稳定的子体铅作为目标检测物，建立了检测氡累积浓度的核酸适配体生物分析新方法。K+诱导富G单链核苷酸PS2.M形成反平行G-四链体四链体，辅因子血红素与G-四联链体结合，形成具有过氧化物酶活性的稳定复合物，催化TMB-H2O2体系发生显色反应。同时加入Pb2+时，Pb2+诱导PS2.M形成结构更加稳定的“缺口”型反平行G-四链体，K+和血红素游离在溶液之中，体系吸光度响应值急剧降低。基于此构建了一种基于Pb2+诱导PS2.M构象改变的过氧化物酶活性“Turn-off”型比色传感器。在5.0×109～1.8×107 mol/L范围内，吸光度降低值ΔA与Pb2+浓度呈线性关系，线性回归方程为ΔA=0.36+0.13C， R=0.9987。本方法对Pb2+的检出限为3.76 nmol/L （S/N=3），氡的检出限为1.96×103 Bq?h/m3 （S/N=3）。本方法灵敏、准确，样品溶液可直接检测，操作简单，避免了现场进行氡辐射剂量测量的放射性危害，为环境中氡的检测提供了新方法。 　　关键词 氡；子体铅；核酸适配体；G-四链体；构象转变；比色传感 　　1 引 言 　　氡是天然放射系中唯一无色、无嗅、无味的气体放射性元素，半衰期为3.82天，是室内放射性气体污染物的主要存在形式[1，2]。经过一系列短寿命子体链的衰变，氡产生的稳定子体210Pb半衰期长达21年[3]。室内氡照射和吸烟具有协同效应，是导致肺癌的第二大杀手[4，5]。世界卫生组织与国际癌症研究机构已将氡列为19种致癌物质之一[6]。研究表明，21世纪以来我国室内平均氡浓度较20世纪80年代和90年代分别上升了57%和42%[7]，室内氡污染的危害受到越来越多的关注。因此，科学有效地采集和检测室内中的氡浓度，建立经济、有效、简便/快捷的检测氡的累积辐射剂量的方法具有重要的卫生学意义[8]。 　　近年来，核酸适配体（Aptamer）已经广泛应用于生命科学、临床诊断、药物筛选和环境科学等领域[9～11]。在重金属离子的检测中，核酸适配体得到了充分应用，Liu[12]和Jiang[13] 等利用Hg2+可以形成T-Hg-T结构，实现对Hg2+的高特异性和高灵敏度的检测。Lu等[14]通过Pb2+能诱导富G核酸链-TBAA特异性形成G-四链体结构，从而实现Pb2+的高特异性和高灵敏度的可视化检测。邓欢等[15]将门控制效应和核酸适配体结合，构建检测Pb2+的电化学生物传感器。Long[16]与Deng[17] 等基于Pb2+诱导核酸适配体PW17和T30695构型改变导致体系荧光强度变化，开展了氡的非标记荧光传感生物分析新方法研究。 　　G-四?体构象的稳定性与其所结合的阳离子种类有关，不同构型G-四链体与Hemin结合后催化活性差异明显，表现出不同的过氧化物酶活性[18～20]。Kong研究组基于G-四链体与Hemin结合具有过氧化物酶活性，催化ABTS-H2O2系统显色，构建了Ag+、Hg2+等重金属的检测平台[21～23]。本研究根据氡辐射衰变特点，结合Pb2+的现代分析技术，研究了K+和Pb2+诱导PS2.M分别形成不同结构G-四链体的特性，建立了一种基于Pb2+诱导PS2.M构象改变的过氧化物酶活性“Turn-off”型比色传感器，实现了Pb2+和氡的灵敏检测。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器和试剂 　　UV-2550紫外-可见分光光度计（日本岛津仪器公司）； J-815圆二色谱光谱仪（日本Jasco公司）； AB204-S电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）； PB-20（PB-S）型精度酸度计（德国赛多利斯公司）； 氡室（南华大学核工业第六研究所）； 混合纤维素膜（Merck Milipore公司）。 　　冰醋酸（HAc，天津市福晨化学试剂厂）； 三羟甲基氨基甲烷（Tris）、KCl（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）； 铅标准溶液（100.0 μg/mL，中国计量科学院）； 富含鸟嘌呤的寡核苷酸链PS2.M（5-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3，上海生工生物工程股份有限公司合成）； 氯化血红素（Hemin）、3，3，5，5-四甲基联苯胺（TMB， 上海西格玛奥德里奇贸易有限公司）； HCl、H2O2（广东光华科技股份有公司）； 实验用水均为灭菌超纯水（电阻率为18.25 MΩ?cm）。 　　2.2 氡样本的采样方法[16] 　　以10 mL 0.2%（V/V）冰醋酸作为吸收液，以直径70 mm、高17 mm一次性塑料培养皿为收集器，在平皿口加封混合纤维素膜（孔径为0.8 μm，Milipore公司）； 设定采样时间，将采样器放