中期阿尔茨海默病小鼠模型海马组织Mst1r基因甲基化初析.docVIP

中期阿尔茨海默病小鼠模型海马组织Mst1r基因甲基化初析 　　[摘要] 目的 探讨Mst1r基因在中期病程阿尔茨海默病模型（presenilins条件性双基因敲除小鼠，dKO mice）中海马组织的甲基化状态。 方法 选取12月龄雌性dKO mice及同系野生型小鼠各3只，采用二代测序技术（简化表观亚硫氢酸盐测序技术，RRBS）检测其海马组织基因组DNA以获得甲基化异常基因。 结果 RRBS测序成果显示中期AD dKO mice海马组织中Mst1r基因呈超甲基化状态（P0.05）。 结论 超甲基化的Mst1r基因可能在中期AD dKO mice的病理过程中发挥着一定作用。 　　[关键词] Mst1r基因；阿尔茨海默病；DNA甲基化；dKO mice 　　[中图分类号] R749.16 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）15-13-03 　　[Abstract] Objective To explore the methylation status of Mst1r in the hippocampus of the Alzheimer disease （AD） model（presenilins conditional double knockout mice，dKO mice） in the medium term disease. Methods 3 cases of 12 month old female dKO mice and 3 cases of 12 month old syngeneic wild-type mice were selected.The two generation sequencing technology（simplified apparent sulfurous acid salts sequencing technology，RRBS）was used to detect the hippocampus to obtain genomic DNA methylation gene. Results RRBS sequencing showed that the Mst1r gene in the metaphase AD dKO mice hippocampus was hypermethylation（P0.05）. Conclusion Hypermethylation of the Mst1r gene may play a role in the pathological process of metaphase AD dKO mice. 　　[Key words] Mst1r gene；Alzheimer disease；DNA Methylation；dKO mice 　　阿??茨海默病（Alzheimer’s disease，AD），作为老年痴呆症的主要形式，是一种具有进行性发展病程的神经系统退行性病变，典型临床症状为进行性记忆力下降、认知功能减退以及神经行为异常[1-3]。其主要病理变化包括由过度磷酸化的tau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结、β-淀粉样蛋白（amyloid β-protein，Aβ）沉积为主形成的老年斑、神经元数目减少以及神经胶质细胞的改变等 [2-4]。但其具体的发病机制仍然尚不明确，因此对其进行早期研究、诊断、预防以及治疗等都有着极其重大的经济与社会意义。本实验通过简化表观亚硫酸氢盐测序技术（reduced representation bisulphite 　　sequencing，RRBS）初步建立起了12月龄中度神经系统退行性疾病AD模型 dKO mice海马组织中基因组DNA甲基化谱，从而发现了超甲基化的基因Mst1r，这为后续进一步验证以及深入探讨AD的发病机制提供了参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　亲代dKO mice（基因型为Cre+/-，fPS1/fPS1，PS2-/-）由美国Ya-Ping Tang教授（Louisiana State University，USA）惠赠，其品系为B6CBAF1，是将小鼠前脑中的presenilin-1（PS1）基因通过Cre/loxP系统进行条件性敲除，所获得的杂合子与将presenilin-2（PS2）基因通过基因打靶技术进行全身性敲除所获得的杂合子杂交获得[5]。子代dKO mice的喂养、传代以及基因型判定方法如我们之前报道[6]所述。实验组：12月龄dKO mice 3只，雌性，平均体重（35.0±2.6）g；对照组：12月龄野生型小鼠3只，雌性，平均体重（37.0±1.8）g。将6只实验小鼠的海马组织进行RRBS测