两种生态类型蚯蚓血液蛋白质组分电泳剖析.docVIP

两种生态类型蚯蚓血液蛋白质组分电泳剖析 　　摘要：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术对不同生态类型的微小双胸蚓（Bimastus parvus）和威廉环毛蚓（Pheretima guillelmi）血液蛋白质进行分离比较。结果表明，威廉环毛蚓血液蛋白质电泳扩增出6条条带，微小双胸蚓血液蛋白质电泳扩增出5条条带，表栖型的微小双胸蚓比内栖型的威廉环毛蚓少了一个组分。形成血液蛋白质组分的差异性可能与蚯蚓生态适应性有关。 　　关键词：微小双胸蚓（Bimastus parvus）；威廉环毛蚓（Pheretima guillelmi）；血液；蛋白质组分；聚丙烯酰胺凝胶电泳 　　中图分类号：S899.8 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）03-0753-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.03.052 　　Abstract： Two distinct ecological categories of earthworm Bimastus parvus and Pheretima guillelmi blood protein were separated and studied with the help of PAGE technology. The results indicated that the Bimastus parvus blood protein had 6 electrophoresis belt number and Pheretima guillelmi blood protein had 5 electrophoresis belt number， epigeic Bimastus parvus showed less a component than endogeic Pheretima guillelmi. The formation of blood protein components difference may be related to earthworm ecological adaptability. 　　Key words： Bimastus parvus； Pheretima guillelmi； blood； protein components； PAGE 　　蚯蚓属于环节动物门（Annelida）寡毛纲（Oligochaeta）陆生动物，广泛存在于土壤生态系统中。在土壤生态系统中，蚯蚓占土壤生物量的60%～80%，是土壤生态系统中的重要组成部分[1，2]。作为一类在自然界中存在了6亿年的古老动物，蚯蚓在漫长的进化过程中形成了摄食行为[3]、回避行为[4]、掘穴行为[5]、光感行为[6]等生态学特征。在蚯蚓的生态适应性上，呈现出表栖型（Epigeic）、内栖型（Endogeic）和深栖内栖型（Anecic）三种习性，属于差别比较大的生态类群[7]。另外，在分子和细胞水平上，由于蚯蚓处于食物链底端，与土壤中的各种污染物接触相对密切，蚯蚓体内形成了独特而有效的免疫与抗菌系统[8]、抗氧化酶防御系统[9]、高活性的纤维素水解酶[10]以及细胞色素 P450、GST、AChE等对环境污染响应比较敏感的酶系[11]，以适应不良的生存环境和对抗不利因素。在蚯蚓的生态适应性的生理水平上，为了适应长期在土壤中的生存，蚯蚓通过湿润的体壁来进行呼吸氧气并排出血液中的二氧化碳，在生理上形成了由纵血管、环血管和微血管组成的多心脏（4～5对）的闭管式循环系统结构。本试验采用（PAGE）技术对表栖型的微小双胸蚓（Bimastus parvus）和内栖型的威廉环毛蚓（Pheretima guillelmi）的血液蛋白质组分进行了分析，比较了不同生态类型蚯蚓血液中蛋白质组分的差异性，为进一步研究蚯蚓的生态适应性提供参考。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料、药品与仪器 　　材料：微小双胸蚓和威廉环毛蚓，采自成都某农场的大田土壤中。 　　主要药品与设备：丙烯酰胺（Acr）、N，N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）、四甲基乙二胺（TEMED）、核黄素过硫酸铵（AP）、三羟甲基氨基烷（Tris）、甘氨酸Gly-溴酚蓝等均为分析纯。GL-20G-Ⅱ型高速冷冻离心机，DY-501型电泳仪，DYCZ -24D型电泳槽，AcerScan 620P 扫描仪。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 蚯蚓血液的采集 选择成熟的微小双胸蚓和威廉环毛蚓，用pH 6.8 的PBS缓冲液反复冲洗干净，从背侧的心脏部位进行局部剪开，用挤压方法使一对心脏露出，用0.5 mL的注射器配以特制的细针快速刺入心脏抽取血液。把采集到的蚯蚓血液注射到预先冷却至4