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SPE和HPLC对微生物降解体系中十溴联苯醚含量的测定-农学论文 SPE和HPLC对微生物降解体系中十溴联苯醚含量的测定 赵银平，赵晓祥，王 玥 （东华大学环境科学与工程学院，上海 ２０１６２０） 摘要：采用固相萃取法提取菌ＧＨ１０降解体系中的十溴联苯醚（ＢＤＥ－２０９），高效液相色谱法测定十溴联苯醚的含量，并对各种试验条件进行了优化。结果表明，固相萃取的最佳洗脱剂为正己烷／二氯甲烷（１∶１，Ｖ／Ｖ），最佳洗脱体积为４ ｍＬ（２ ｍＬ×２）；高效液相色谱法的最佳检测条件：检测波长为２６０ ｎｍ，柱温箱温度为３０ ℃，流动相为乙腈∶水（９５∶５，Ｖ／Ｖ），流动相流速为１．２ ｍＬ／ｍｉｎ，在此条件下 ＢＤＥ－２０９的出峰时间为２４．７０５ ｍｉｎ；菌ＧＨ１０在３ ｄ内能够快速降解高浓度ＢＤＥ－２０９（５０ ｍｇ／Ｌ），第３天的降解率达到最高为５９．２４％。通过固相萃取法和高效液相色谱法能够快速提取和检测微生物降解体系中的十溴联苯醚，该方法操作简单，节省时间。 关键词 ：十溴联苯醚（ＢＤＥ－２０９）；固相萃取法（SPE）；高效液相色谱法（HPLC）；菌ＧＨ１０；降解率 中图分类号：Ｏ６５７．７＋２文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）05－1198-05 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.05.043 收稿日期：２０１４－０４－１０ 基金项目：上海市基础研究重点项目（０９ＪＣ１４００６００） 作者简介：赵银平（１９８９－），女，河南林州人，在读硕士研究生，研究方向为环境微生物学，（电话）１８８１８２３６９２４（电子信箱）ｒｅｎｇｅｂｅｎｇｃｕｉ＠１６３．ｃｏｍ； 通信作者，赵晓祥，研究员，硕士生导师，主要从事有机污染物的降解、监测与分析等相关研究,（电子信箱）ｚｘｘ＠ｄｈｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。 多溴联苯醚（ＰＢＤＥｓ）是一类高效添加型溴系阻燃剂，被广泛应用于各种电子、电器、纺织、建材等产品中［１，２］。而这些产品在大量生产、使用和废弃的过程中，均不同程度地使ＰＢＤＥｓ进入各种环境介质当中，甚至在人的毛发和母乳中都能检测到［３－６］。据研究表明，ＰＢＤＥｓ具有致癌性及内分泌干扰毒性［７－１２］，因此环境中的ＰＢＤＥｓ严重威胁人类健康及生态安全。 多溴联苯醚中的十溴联苯醚（ＢＤＥ－２０９）因其具有溴化程度高，阻燃性能好，价格低等优点，所以是使用最多的一种ＰＢＤＥｓ［１３，１４］。目前，环境样品和生物样品中ＢＤＥ－２０９的提取方法主要有索氏提取、液液萃取、超声波辅助萃取和固相萃取（ＳＰＥ）等方法［１５－１７］。相比于其他方法，固相萃取具有耗时短、消耗溶剂少、操作简便等优点，可以高效提取样品中的ＢＤＥ－２０９。ＢＤＥ－２０９的检测方法主要有高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）和气相色谱－质谱联用法（ＧＣ－ＭＳ），其中ＧＣ－ＭＳ的离子源多采用ＮＣＩ源［１８］，而采用ＥＩ源的ＧＣ－ＭＳ不能检测高溴代联苯醚，例如ＢＤＥ－２０９。 本研究采用微生物法对ＢＤＥ－２０９进行降解，并采用固相萃取法（Ｃ１８固相萃取小柱）和ＨＰＬＣ法对降解体系中的ＢＤＥ－２０９进行提取和检测。试验过程中对ＨＰＬＣ的检测条件进行了优化，同时考察了不同溶剂对ＢＤＥ－２０９的萃取效率，为水相中高浓度ＢＤＥ－２０９的提取和检测提供一定的理论依据及基础。 １ 材料与方法 １．１ 试验材料 １．１．１ 试剂 二甲亚砜（ＡＲ级），二氯甲烷（ＡＲ级），正己烷（ＡＲ级），四氢呋喃（ＡＲ级），甲醇（ＨＰＬＣ级），乙腈（ＨＰＬＣ级），均购自上海凌峰化学试剂有限公司；ＢＤＥ－２０９（纯度９９％，百灵威科技有限公司）。ＢＤＥ－２０９储备液：以二甲亚砜为溶剂配成浓度为１ ０００ ｍｇ／Ｌ的ＢＤＥ－２０９储备液。ＢＤＥ－２０９标准溶液：以二甲亚砜为溶剂将ＢＤＥ－２０９储备液稀释成浓度为１００ ｍｇ／Ｌ的ＢＤＥ－２０９标准溶液。将无水硫酸钠置于马弗炉中于４５０ ℃下烘４ ｈ以上，稍冷后放入干燥器中冷却，密封保存，备用。 １．１．２ 培养基 ①ＬＢ液体培养基：鱼粉蛋白胨１０ ｇ、酵母粉５ ｇ、氯化钠５ ｇ、去离子水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０。②ＬＢ固体培养基：向ＬＢ液体培养基中加入２％的琼脂即可。③无机盐培养基（ＭＳＭ）：ＫＨ２ＰＯ４ ２．６５ ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ４．２６ ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．２ ｇ、ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ ０．０２ ｇ、ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．０１４ ｇ、ＮＨ４Ｃｌ ０．５ ｇ、微量元素 １ ｍＬ；去离子水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０。其中微量元素溶液组成为： ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ２．１ ｇ、 ＺｎＣｌ２ ０．０７ ｇ、 ＣｕＳＯ４·５