鸡腿蘑黑斑病及其病原的研究初报.docVIP

鸡腿蘑黑斑病及其病原的研究初报 　　研究了鸡腿蘑（Coprinus comatus）黑斑病的发生情况、症状及病原菌的分离、培养、回接、鉴定等，证实轮枝孢霉（Verticillium ??sp.）是引起鸡腿蘑黑斑病的病原菌。?? 　　鸡腿蘑；?A黑斑病；?A症状；?A病原；?A轮枝孢霉?? 　　S646.101??A 　　 　　鸡腿蘑（Coprinus comatus）又名毛头鬼伞、毛鬼伞、刺蘑菇，隶属于真菌门（Eumycophyta），担子菌亚门（Basidiomycotina），层菌纲（Hymenomycetes），伞菌目（Agaricales），鬼伞科（Coprinaceae），鬼伞属 （Coprinus）。鸡腿蘑子实体味道鲜美，是一种食、药兼用蕈菌，深受消费者的欢迎，在国际、国内市场的需求量大。由于栽培鸡腿蘑的经济效益高，近年来，我国的鸡腿蘑产量逐年上升。但随着栽培年限的延长，特别是设施周年栽培的普及，病虫害问题逐年加重。 2004年，我们在山东省长清、平阴、东平等地发现了一种鸡腿蘑新病害――黑斑病。该病发病快、传染性强、危害严重，影响了鸡腿蘑的高产稳产。因此，我们对鸡腿蘑黑斑病发生的症状和病原菌的显微形态进行了调查研究，旨在明确该病的病原菌、并为鸡腿蘑黑斑病的有效防治提供技术支持。?? 　　 　　1 材料和方法 　　 　　1.1?ρ?本采集 　　试验样本于2005年7月下旬采自山东省长清崮山镇一山洞栽培的鸡腿蘑出菇现场。该栽培洞温度偏高（22 ℃左右）,顶部及四壁滴渗水,空气湿度大,通风条件差。该病同批发生面积大（约6000 ?O），发病率在70%以上，发病快、危害严重且传染性极强，难于控制其蔓延。试验样本为感染黑斑病的鸡腿蘑头潮子实体，多点取样采集病菇样本后带回实验室进行分离纯化培养。?? 　　1.2?Σ≡?菌分离纯化 　　1.2.1?ε嘌?基 　　复合PDA培养基：马铃薯200 g，麦麸30 g（滤汁），葡萄糖20 g，蛋白胨3 g，磷酸二氢钾??2 g，硫酸镁1 g，琼脂粉20 g，蒸馏水1000 mL。?? 　　酸化复合PDA培养基：复合PDA培养基灭菌后，每100 mL培养基中加入1 mL乳酸（山东省莱阳经济技术开发区精细化工厂生产的分析纯，C2H6O3含量85%～99％）酸化，用于病原菌分离。?? 　　1.2.2?Σ≡?菌分离方法 　　参照方中达的组织分离法［1］。将感病子实体纵刨，夹取病健交界处大约2～3 mm2的一小块菌肉组织,置于分离培养基平板上，共分离30块组织块（每点分离2～3块），25 ℃培养5 d，连续纯化2～3次得到菌丝组织纯培养物，保存于复合PDA试管斜面上备用。?? 　　1.3??回接试验 　　按文献［1］的方法将分离到的病菌制成孢子悬浮液，喷雾接种到生长中的健康鸡腿蘑子实体上，对照喷无菌水。分离获得的每个病菌菌株均为一个接种处理，每个处理与对照均重复2次，每个重复5个菌筒，接种后于12～21 ℃、空气相对湿度90%培养5 d，观察鸡腿蘑子实体的发病情况。?? 　　1.4?Σ≡?菌显微鉴定 　　将分离得到的原病原菌和回接试验分离得到的病原菌分别接种于复合PDA平板上， 25 ℃培养7 d后，观察平板上的菌落生长形态；在Olympus AO-120显微镜下(600×)检测病原菌菌丝及分生孢子形态。?? 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1?Σ『χ⒆刺氐? 　　鸡腿蘑黑斑病发病初期，菌蕾或幼菇表面可见一层白粉状病原菌，之后菌盖上出现黑褐色斑点，并逐渐扩大，病斑中心凹陷、色泽变深，产生灰白色病原物，后期形成较多粉状孢子。幼菇发病后可继续生长，但发育不良，色泽灰白，病斑部位质地较干，局限于菌盖表层组织。随着菇体生长和病斑发展，子实体多呈畸形，菌盖短薄，病斑部位开裂干腐，后期菌柄受感染，上部外层组织剥裂，表面粗糙，产生黑斑，菌肉由外向内变污白至黄褐色，病菇腐烂速度较慢，一般不湿腐，不分泌褐色汁液，无特殊臭味。病菌侵染由外向内，病菇整体很快变黑褐，失去商品价值。该病在菇房中传染性极强，一丛菇体中若有一个子实体菌盖开始发病，很快便传染到菇丛中的其它菇或邻近菇丛，最后造成大面积减产甚至绝产。鸡腿蘑黑斑病症状见图1。?? 　　2.2?Σ≡?菌分离、回接与确认 　　从30块组织块中，共分离获得16株相同的病原菌菌株(有12块长出单一的病原菌，有4块同时长出了鸡腿蘑菌丝和病原菌，其余14块均只长出鸡腿蘑菌丝)，病原菌检出率为53.3％，未检出其它杂菌。将16个病菌菌株重新回接到健康的鸡腿蘑子实体上，结果16个菌株均引起鸡腿蘑子实体出现黑斑，与菇房自然发病症状相同，而对照子实体生长正常，无任何症状。从发病子实体上可以重新分离到病原菌，其培养性状与接种