碱性果胶酶高产菌株构建和高密度发酵.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 望潇文 等/碱性果胶酶高产菌株的构建和高密度发酵 2017 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn December 25, 2017, 33(12): 2017−2027 DOI: 10.13345/j.cjb.170087 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物育种与工艺优化· 望潇文，向腊，徐婷，卢争辉，张桂敏 湖北大学生命科学学院 生物资源绿色转化湖北省协同创新中心，湖北 武汉 430062 望潇文, 向腊, 徐婷, 等. 碱性果胶酶高产菌株的构建和高密度发酵. 生物工程学报, 2017, 33(12): 2017–2027. Wang XW, Xiang L, Xu T, et al. Construction and high-density fermentation of alkaline pectate lyase high-yield yeast. Chin J Biotech, 2017, 33(12): 2017–2027. 摘 要: 碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺，与传统的高温碱煮相比，具有保护纤维、降 低能耗和化学污染的优势，因此获得高表达的碱性果胶酶基因工程菌，低成本生产碱性果胶酶对于纺织工业节能 减排具有重要的意义。前期研究工作已经将来源于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168 的碱性果胶酶基因pel 经过 密码子优化后在毕赤酵母Pichia pastoris GS115 中成功表达。本研究为了提高其表达量，首先利用启动子和信号 肽都优化的载体pHBM905BDM 进行表达，摇瓶酶活从68 U/mL 增加到 100 U/mL，qPCR 检测转录水平提高了 27% 。再利用果胶底物平板筛选水解圈大的转化子进行摇瓶发酵获得菌株 GS115-pHBM905BDM-pels 4 ，摇瓶酶 活为536 U/mL。随后构建重组质粒pPIC9K-pels ，电转化菌株GS115-pHBM905BDM-pels 4 ，利用抗生素G418 平 板进行筛选，在含 4 mg/mL 的 G418 抗性平板上得到菌株 GS115-pHBM905BDM-pPIC9K-pels 1，摇瓶酶活为 770 U/mL ，qPCR 测定含7 个拷贝目的基因。最后将该菌株在5 L 的发酵罐中进行高密度发酵，果胶酶酶活提高 至2 271 U/mL 。该碱性果胶酶酶活已达到目前酵母表达的最高水平，说明其具有很好的应用于纺织工业的潜力。 : 碱性果胶酶，毕赤酵母，G418 抗性标记，组氨醇脱氢酶基因 (HIS4) 选择标记，高密度发酵 Construction and high-density fermentation of alkaline pectate lyase high-yield yeast Xiaowen Wang, La Xiang, Ting Xu, Zhenghui Lu, and Guimin Zhang Bioresources Green Transformation Collaborative Innovation Center of Hubei Province, College of Life Sciences, Hubei University, Wuhan 430062, Hubei, China Abstract: Pectate lyase is widely applied in ramie degumming and fabric bioscouring in the textile industry. Compared to Received: March 5, 2017; Accepted: April 19, 2017 Supported by: