核因子Kb受体活化因子其配体在糖尿病大鼠肾脏中的表达氯化锂的防治作用.pdfVIP

贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 在破骨细胞分化、发育和成熟过程中起关键性作用。当 RANKL 和 RANK 的结合后, 再募集肿瘤因子受体相关因子(TRAFs), TRAFs 可通过特化的效应域激活核转录 因子 κB(NF- κB)或分裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)。而 NF- κB为 RANKL/RANK 的信号传导的下游分子,不但能促进细胞因子的分泌,而且可以调节细胞的生存、 [4] 凋亡、分化及活化等 。核因子κB(nuclear factor kappa, NF- κB)是一种核 蛋白因子，几乎存在于体内所有组织细胞中，但是 p50 ／p65 异源二聚体最常见 [5]。NF- κB参与诱导很多种细胞因子、粘附分子、趋化因子、免疫识别受体和急 性期反应蛋白编码基因的表达，也对参与炎症反应放大与延续的多种酶基因的表 [6] 达具有重要的调控作用 。当细胞受到应激、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor- α，TNF- α)等外界信号刺激时，NF- κB 活化并转移进入细胞核内，与 靶基因结合，进而调节细胞的免疫、炎症反应及调控细胞增殖。在肾脏的毛细血 管内皮细胞、肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞和由血液循环进入肾脏的血液免 疫细胞中均存在 NF- κB 的转录调控。NF- κB 可在高糖状态下被激活，引起蛋白 尿增加、肾小球硬化、肾小管间质纤维化等肾脏病变，导致糖尿病肾病的发生发 展。有研究发现，糖尿病肾病时，肾组织中过度激活的 NF- κB 参与了多种致病 因子的合成、细胞外基质交联以及成纤维细胞的分化过程，参与了多种炎性反应 的信号转导过程。 MAPKs 是一组包括多种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的家族,可参 与调节细胞 MMP （基质金属蛋白酶）活性。而基质金属蛋白酶与肾小球及肾小管 纤维化病变有关。 既往对 RANK-RANKL 系统的研究主要集中在骨质疏松、类风湿性关节炎等骨系 统疾病中。近年来, 研究发现 RANK-RANKL 系统不仅参与淋巴细胞的发育及淋巴 器官的形成,而且还可在胚胎肾脏、肌成纤维细胞、血管内皮细胞、乳腺上皮细 胞、外周单个核细胞及胃癌等细胞中表达,该系统尚参与自身免疫性疾病的发生 发展。既往有研究表明在鼠 5/6 肾切除的肾小球硬化模型中发现，损伤的足细胞 高表达 RANK[7-8] 。 对于 DN 的治疗目前尚缺乏行之有效的手段，积极探索DN 的发病机制及寻找 有明确疗效的治疗药物有其极为重要的意义。本实验拟通过建立 1 型糖尿病大鼠 模型，观察糖尿病大鼠肾脏的形态学改变，用免疫组化检测 RANK-RANKL 的表达 情况，用实时荧光定量 PCR 检测 RANK mRNA，从组织学、分子生物学水平探讨 6 贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 糖尿病大鼠肾脏病变的发生机制，为今后 DN 的研究提供实验依据和理论参考， 并提供新的治疗思路。 材料与方法 1.实验材料 1.1 实验动物 健康 SD 大鼠(贵阳医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(黔)2012-001 24 只，雄性，6-8 周龄，体重 200-250g。 1.2 主要仪器 易稳得血糖分析仪 深圳市鑫台欣公司 血糖试纸 深圳市鑫台欣公司 Gel Doc EQ 型 DNA 成像分析仪 美国 BIO-RAD 公司 TC-512 型梯度 PCR 扩增仪 英国 TECHNE 公司 光学显微镜 日本OLYMPUS 公司 梯度 PCR 扩增仪 德国Eppendorf 公司 定量 PCR 仪 美国 ABI 公司 ABI7300 PCR 扩增仪 美国生物系统公司 PE 9700 型，PE 2400 型 DYY-Ⅲ-5 型稳流电泳仪及电泳槽