溶菌酶对血链球菌和变异链球菌影响的扫描电镜观察.PDF

中国科技论文在线 溶菌酶对血链球菌和变异链球菌影响的扫描电镜观察 李利，郝玉庆，焦延卿，尹星泉，李伟 口腔疾病研究国家重点实验室 四川大学，成都（610041 ） E-mail:lw@ 摘 要：目的：研究溶菌酶对血链球菌和变异链球菌的影响，观察PH 值不同，溶菌酶对血 链球菌的作用有无差异。方法：1.血链球菌和变异链球菌生长至对数生长后期，溶于PH7.0 的GEB 缓冲液(Gibbons Etherden buffer) ，菌浓度为1 ×107(CFU)/mL，加入鸡蛋清溶菌酶 （(HEWL, Sigma) ，使对照组和实验组的酶浓度分别为0 和 50 µg/mL 。常温下反应3 ，8， 12 分钟后制备样本，扫描电镜观察。2.将血链球菌溶于PH5.0 的GEB 缓冲液，方法同上。 结果：1.对照组血链球菌和变异链球菌菌体完整，膜表面光滑。溶菌酶作用后，细胞壁表面 变粗糙，出现孔洞，细菌明显胀大变形，失去原有形态。随处理时间增加，血链球菌和变异 链球菌细胞表面损害加剧。相同时间点对比观察，发现血链球菌比变异链球菌菌表面破坏明 显。2.溶菌酶对血链球菌作用酸性条件比中性条件下更加明显，血链球菌损害更明显，菌体 胀大，孔洞增多。结论：1.血链球菌对溶菌酶反应较变异链球菌敏感。2.酸性条件下，溶菌 酶对血链球菌作用较中性条件强。 关键词：血链球菌；变异链球菌；溶菌酶；扫描电镜 1.引 言 溶菌酶(lysozyme)是水解酶的一种，又称胞壁质酶（muramidase ）或N- 乙酰胞壁质肽聚 糖水解酶（N-acetymuramideglycanohydrlase ）。它是一种由 129 个氨基酸组成的碱性蛋白质， 能作用于细菌的细胞壁破坏肽聚糖支架，在内外渗透压的作用下引起细菌裂解[1] 。溶菌酶作 为机体非特异性免疫因子之一 ,参与机体的免疫反应 ,从而保持机体生理平衡。它是人唾液 中重要的抗菌成分 ,参与宿主对细菌的非免疫防御 ,调节口腔环境的生态平衡[2]，继而影响 唾液中的链球菌种类，影响口腔中的细菌组成[3] 。部分口腔细菌可以突破粘膜屏障引起局部 感染或系统性疾病[4] 。口腔链球菌群是最常见的引起感染性心内膜炎的细菌，其中血链球菌 和变异链球菌都较常被分离得到[5] 。口腔链球菌群能逃避免疫细胞的吞噬作用是他们导致感 染性心内膜炎重要的致病机理[6] 。由于溶菌酶是口腔内的重要免疫因子，它还可改善和增强 巨噬细胞吞噬和消化功能,激活白细胞吞噬功能,从而增强机体的免疫力。溶菌酶还具有激活 [2] 血小板的功能 ,可以改善组织局部血液循环 ,增强局部防御功能 。本研究通过观察相同条 件下不同浓度溶菌酶作用于血链球菌和变异链球菌的情况，比较溶菌酶对这两种菌作用的差 异。 2 ．材料和方法： 2.1 实验菌株 变异链球菌（streptococcus mutans，S. mutans）ATCC 25175 ，血链球菌（streptococcus sanguinis, S. sangunins ）ATCC10556 ，口腔疾病研究国家重点实验室提供。 2.2 实验材料及制备 鸡蛋清溶菌酶（Hen egg white lysozyme, HEWL,sigma ），用消毒的 0.1M 磷酸缓冲液配成 浓度为 1mg/ml 的溶菌酶溶液，孔径为0.22um 的一次性滤器过滤除菌，4 ℃保存备用。 资助来源：教育部博士点科研基金(20080610075) -1- 中国科技论文在线 GEB 缓冲液(Gibbons Etherden buffer) ：0.1 mmol/L 磷酸缓冲液, 55mmol/L KCl, 1 mmol/L CaCl2, and 0.1 mmol/L MgCl2 ，分别将pH 调至 7.0 和 5.0。 2.3 试验方法 2.3.1 菌液制备 变异链球菌和血链球菌接种于 BHI