体外大量扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞与其细胞生物学特性的初步分析.pdfVIP

中文摘要 体外大量扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞及其细胞 生物学特性的初步分析 摘 要 研究背景 肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的过继性细胞治疗最早被报道是在1988年， Rosenberg和他的同事首次证实了将TIL做为一种免疫治疗的方法治疗恶性黑色 素瘤可以使肿瘤消退。随后关于TIL的研究越来越多，其中应用于临床治疗效 给患者回输TIL前减少患者自身的淋巴细胞可以使回输TIL治疗有效率提高至 50％，而在随后2005年他们的报道中改进回输前临床预处理方法后患者的治疗有 效率可以高至70％。恶性黑色素瘤的传统治疗方法包括IL．2和氮烯唑胺，其治疗 有效率仅有15％．25％，而这样比较看来TIL的高治疗有效率使其治疗优势大为突 出。 肝癌和恶性黑色素瘤一样，也属于免疫原性较强的恶性肿瘤，除了早期手 术治疗外，后期没有有效的治疗方法，人们一直在努力尝试使用免疫治疗的手 段来治疗肝癌。而免疫治疗除了CIK外TIL开展较少，其很大部分原因在于没 有成熟的培养和扩增TIL的方法，技术上的不稳定限制了临床的应用，而本次 课题的主要目地就是探索体外培养和扩增原发性肝癌TIL的技术，为TIL应用 于临床治疗肝癌打下基础。 目的： 1．探讨体外大量扩增原发性肝癌TIL的方法。 2．初步研究它们的分子表型，检测其分泌细胞因子能力并分析其细胞功能特 征。 3．观察不同的辐照剂量(0，l，2Gry)对细胞表型及功能的影响。 中文摘要 方法： 原发性肝癌的标本来源均为手术切除的肿瘤原发灶。这些标本经混合消化酶 消化为单个细胞后，应用不连续密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞，分瓶种 植后进行不同剂量的辐照处理(O，l，2Gry)，然后应用2步培养法大量扩增TIL， 并检测它们的扩增速度。应用流式细胞仪检测不同剂量下扩增的淋巴细胞的分 平以及植物血凝素(PHA)束IJ激后这些细胞因子的分泌水平，分析扩增TIL分泌细 胞因子的能力及对其功能影响。最后比较经过不同剂量的辐照后TIL表型的变 化以及细胞因子分泌的变化，由此推断辐照对TIL功能的影响。 结果： l 1．20例原发性肝癌标本有l8例能成功培养TIL并将其扩增至lJ0lo个数量级。 2．6％士O．9％。 l12．44-34．5pg／ml。 4．辐照对TIL细胞表型以及分泌细胞因子功能的影响。不同的样本对辐照的 反应不同，进行辐照的10个以CD8+细胞为主的TIL样本中有8个样本可以通过 流式检测到细胞群的规律性变化，这8个TIL样本随着辐照剂量的增加 的辐照剂量下最多，而后是未经辐照的和2Gry剂量。 5．进一步检测TIL分泌细胞因子发现，经辐照不同剂量后的TIL分泌细胞因 Il 中文摘要 细胞的变化而变化，在6个随着辐照剂量增加而减少的CD3+CD56+T细胞的样本 而且这些变化趋势可以出现在无论有没有进行PHA刺激的TIL内。 关键词：原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞两步法扩增 Abstract tumour scale ofthe infiltrating Largeamplication from exvivoand oftheir hepatoma analysis lymphocytes character biological Abstract ResearchContext