ga基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用.docVIP

gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 湖南中医药高等专科学校附属第一医院412000 】目的：探讨gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作 用，探索治疗移植静脉再狭窄的方法。方法：选用wistar■大鼠40只，按照处理 方法的不同，平均分成研究组和对照组。对照组在移植静脉后做空白凝胶处理, 研究组则是做重组腺介导gax凝胶涂布处理，观察两组大鼠的mRNA表达、gax 蛋白表达情况和平滑肌细胞表型的变化情况。结果：研宄组中的mRNA表达和 gax蛋白表达指标均有增高，且显著高于对照组；研究组PCNA表达明显减弱且 低于对照组；研究组合成表型和过渡型VSMC数量明显减少，而收缩表型VSMC 数量明显高于对照组，两组综合比较，差异显著P0.05。结论：血管内膜过度 增牛.和平滑肌细胞的合成表型有密切的联系，gax基因过表达状态下，其可以明 显诱使增殖型平滑肌细胞数量减少，在很大程度上抑制了增殖型平滑肌细胞向内 迁移的作用，同时减少了细胞外基质的合成。 关键词】gax基因；移植静脉；平滑肌细胞增殖；抑制作用 社会的老龄化和人们饮食结构的变化，使得动脉缺血性疾病和冠心病的 发病概率每年都在增长。医学技术的发展，采用静脉移植的治疗方式在临床上的 使用频率越来越高。采用静脉移植手术其有一定的局限性，即在早期静脉阻塞的 概率有5%-26%,在晚期则达40%之高，发生静脉阻塞的因素主要是血管内膜增 生和粥样硬化而使血管狭窄［1］。因此，木文对40只wistar大鼠进行研究，探讨 gax基因过表达对平滑肌细胞增殖的影响，现将报告整理如下。 资料与方法 1.1 一般资料 选用wistar大鼠40只，按照处理方法的不同，平均分成研究组和对照 组，各20只。其中，研究组中，雌鼠10只，雄鼠10只，平均体重为(240plusmn;50) g;对照组中，雌鼠9只，雄鼠11只，平均体重为(245plusmn;55) g;所有大 鼠均行自体颈内静脉-颈总动脉移植术。两组大鼠的一般资料差异比较P〉0.05, 存在可比性。 1.2方法 1.2.1治疗方法 对照组在移植静脉后做空白凝胶处理，研究组则是做重组腺介导gax凝 胶涂布处理，具体处理方法是：行自体颈内静脉-颈总动脉移植术后，在移植动 脉和周围吻合的地方涂抹剂量为2times;1011vmiddot;g/ml的rAVV-Gax和浓度 为30%的凝胶［2］。 1.2.2检测方法 免疫组织化学方法：PCNA抗体染色，采用3%双氧水、50mu;l免疫动 物血清和50mu;l过氧货物酶阻断液进行15-20分钟的卵育； 蛋白印迹方法：电泳缓冲液由14.1g氨基乙酸和3.01gTris两者进行水溶。 转印液由ll.lg氨基乙酸和2.3gTris两者进行水溶。取100mg的组织加入溶解缓 冲液，操作流程是电泳-转印-封闭-1抗孵育-2抗孵育-检测结果［3］。 反转录酶链式反应方法：提取RNA，并对其浓度和纯度进行测定，进行 反转录酶链式反应，检测PCR产物。 电镜分析法：采用H-600型透射电镜观察VSMC的超微结构。取移植静脉6块， 用浓度为2.5%的戊二醛进行固定，并用不同浓度的酒精逐级脱水之后切成薄片， 用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色后观察［4】。 1.3观察指标 观察两组大鼠的mRNA表达、gax蛋白表达情况和平滑肌细胞表型的变 化情况。 1.4统计学方法 采用SPSS19.0软件对数据进行统计和分析，用均属差(Xplusmn;S)表 示计量资料，若(P0.05)则差异比较具有统计学意义。 结果 2.1两组人鼠mRNA表达和gax蛋白表达指标对比情况 通过反转录酶链式反应方法，研究组中的mRNA表达和gax蛋白表达指 标均有增高，iL显著高于对照组P0.05,数据见表1。 表1两组大鼠移植静脉后mRNA表达和gax蛋白表达指标比较 分组研究组对照组gax蛋白表达13.71plusmn;3.41 分组 研究组 对照组 gax蛋白表达 13.71plusmn;3.41 4.3plusmn;2.21 54.31plusmn;11.47 2.2两组大鼠PCNA指标对比情况 通过免疫组织化学方法，研究组PCNA表达值为(107.1plusmn;37.9) 明显减弱且低于对照组的(51.2plusmn;26.2) P0.05。 2.3两组大鼠VSMC表型的检测结果对比情况 通过电子显微镜，研究组合成表型和过渡型VSMC (平滑肌细胞)数量 明显减少，而收缩表型VSMC数量明显高于对照组，两组比较差异显著P0.05, 数据见表2。 表2两组大鼠VSMC增殖状态检测结比较 过渡型9.1plusmn;1.6ll.lplusmn;2.3分组VSMC 过渡型 9.1plusmn;1.6 ll.lpl