丹参药材超高效液相色谱指纹图谱研究.docVIP

丹参药材超高效液相色谱指纹图谱研宄 ：刘梅，夏鑫华，侖桂新，王峥涛 】 目的】建立丹参药材中水溶性成分丹酚酸类 和脂溶性成分丹参酮类的超高效液相(UPLC)指纹图谱方法， 为丹参的质量控制提供快速、科学的方法。 方法】以 AcquityC18BEH (2 ImmX 100mm, 1 7ym)色谱柱，乙腈 (A)体积分数0 4%甲酸溶液(B)梯度洗脱，9O°/o5O%A, 010min;75%A, 15min。检测波长280nm,柱温 30 °C，流速 0 5mL/min。 结果】在1 5min内得到丹参药材水溶性和脂 溶性成分的指纹图谱，峰容量8 5。并采用液质连用技术 (HPLC DAD ESI/MSn)鉴定了其中的20个特征峰。 结 论】UPLC指纹图谱方法具有灵敏、快速、简便、准确等特 点，适合于丹参药材及其制剂的指纹图谱研究和质量控制。 关键词】丹参/化学;丹酚酸类/分析;丹参酮类/分析; 指纹图谱;色谱法，超高效液相;液质连用 丹参是我国应用最广泛的中药品种之一，临床上有很 好的疗效，以丹参作为原料药或君药的单一或复方制剂种 类繁多。丹参药材指纹图谱的研究主要集中在分别研宄丹 参的水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱［1-6］，这些方法基 本均是将水溶性与脂溶性成分分开，分别建立指纹图谱。 作为一种药材中的两大类成分，若能将两者结合起来，在 同一张谱图上得到表征，直观地比较其化学成分的差异， 将是一项十分有益的工作。目前也有一些报道采用高效液 相色谱一二极管阵列检测器（HPLC DAD）或高效液相色谱 一质谱检测器（HPLC M S）连用的方法建立同时表征丹参药 材中水溶性与脂溶性成分的指纹图谱，但是采用HPL C技术， 尚难以兼顾和保证两类成分都具有良好的分离度，而且耗 时较长。因此，本课题组尝试采用快速色谱技术一一超高 效液相色谱（UPLC）建立丹参的指纹图谱，现报道如下。 1材料与试剂 1 1实验材料共收集了 12个省、市（区）的丹参商品 药材13份（表1）。药材经上海中医药大学中药研究所吴立 宏博士鉴定为唇形科植物Salviami ltiorrhiza Bge.的干燥 根茎。 1 2仪器与试药WatersACQU ITYUPLCTM超高效液相色 谱仪，包括AcquityBin arySolvent Module二元可选四溶剂 高压梯度泵，含在线真空脱气机、Ac quitySampl erModule 低扩散自动进样器、Acq uityTUVDet ector高速紫外检测器 及 Empower II 色谱管理软件（M ilford, Bos ton, MA, USA ） o Milli Qs ystem 超纯水制备器（Millipor e， Bedford, MA, USA）, KQ 250DB数控超声波清洗仪（昆山 市超声仪器有限公司），BP 211D型电子天平（Satorius，德 国）。甲醇、乙醇、甲酸均为分析纯（上海国药集团试剂有 限公司），乙腈为色谱纯（Me rck公司），超纯水为Milli Q处理水(Millipor eCo.)。对照品丹参素钠、原儿茶醛、 咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹 参酮I、丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮IIA均由上海中药标 准化研宄中心提供。 2方法与结果 2 1色谱条件与质谱参数 2 1 1超高效液相色谱条件Acqui tyC18BEH(2 1mmX 100mm , 1 7pm)色谱柱，乙腈(A)_体积分数0 4% 甲酸溶液(B)梯度洗脱，90%50%A, 0?10m in;75%A, 15 min。 检测波长28 Onm,柱温30°C,流速0 5mL/mi n,进样量 2 y L,运行时间15min。表1不同产地丹参药材 2 1 2超高效液相色谱一质谱连用(LC MS)条件 流动相为乙腈(A)—体积分数0 4%甲酸溶液(B),洗脱程 序与上述条件相同。柱后分流，分流比为1 : 50,进样量 10nL,柱温3 0°C，电喷雾离子源(ESI)，源电压-3 2kV, 负离子模式，雾化气(GAS1): 2 33Pa，帘气(CUR): 16ps i，去簇电势(DP): -20V,聚焦电势(FP): -80V,去簇电势 2(DP2): -20V。质谱扫描质量范围质荷比(m/z) 100?800。 2 2样品溶液和标准品溶液的制备 2 2 1样品溶液的制备取丹参粉末0 5g(过40目 筛)，精密称定，精密加入体积分数10%甲醇20mL,浸泡 30min 后，超声提取 30min,放冷，3000r/mi n 离心 lOmin, 取上清液5mL置25m L量瓶中。残渣加甲醇20mL，浸泡30m in后，超声提取60 min,放冷，300 Or/min离心10 min,