凋亡蛋白a与TRAF3相互作用的筛选及相互作用位点的鉴定.docVIP

在化学教学中强化学生的科学素养 一、要让学生掌握好化学基本知鉴定 ：张翠莉，成海恩，王应雄 】 目的：利用酵母双杂交技术在成人肝文库中 筛选能与死亡结构域相关蛋白相互作用的蛋白，并用哺乳动 物细胞中进行了免疫共沉淀验证，以进一步了解Daxx的功 能.方法:利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增Daxx全长ORF， 构建pDBLeu Daxx载体.转化MaV203,检测细胞毒性和自 激活作用，确定His基础表达的3AT浓度.依次转化成人肝 cD NA文库.在营养缺陷型培养基上挑取三阳性克隆.进行回 转实验和免疫共沉淀验证，并利用3 gal分析进行了相互 作用结构域的鉴定.结果：筛库转化效率达到X 106个克隆. 筛选到了一株能与Daxx相互作用的阳性克隆，DNA序列分 析和同源检索表明该阳性克隆为肿瘤坏死因子受体相关因 子3.通过回转及co IP证实了 TRAF3能与Daxx相互作用， 3 gal分析发现TRAF3通过TRAFDomain与Daxx相互作用. 结论:TRAF3通过TRAP Domain与Daxx相互作用，可能参与 了 Daxx的调控和功能，为进一步了解Daxx作用的分子机制 奠定了基础. 关键词】凋亡 0引言 死亡结构域相关蛋白在核内作为转录调控子发挥促凋 亡作用［1］;另一方面，在各种凋亡刺激下，Daxx可以从核 转移到胞质中，介导肿瘤坏死因子受体(TNFR)