核酸杂交酶联桥接剖析系统定量剖析寡核苷酸.docVIP

核酸杂交酶联桥接剖析系统定量剖析寡核苷酸 　　摘 要 建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析（ELBA）系统，用于生物基质中反义寡核苷酸（ODN）药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4 DNA 连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化，确定使用中性亲和素包被的酶标板, 俘获探针与检测探针浓度比为2∶3，S1酶为40 U/孔，显色15 min为最优条件，并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响，建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证，方法学定量范围为0.10～?6.25 nmol/L?。本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量（1 mg/kg）静脉滴注后的药代动力学研究，成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段。 　　关键词 寡核苷酸； 药代动力学； 定量； 核酸杂交； 酶联桥接分析系统? 　　 　　1 引 言? 　　反义（Antisense，AS）寡核苷酸（Oligodeoxynucleotide，ODN）、免疫刺激基序（CpG）ODN等分子，在抗肿瘤、抗病毒治疗等基因治疗领域中占据重要地位。迄今，AS?ODN与CpG ODN类药物经美国FDA批准上市，已有多种该类药物处于临床前和临床试验阶段??\?。? 　　目前，生物样品中ODN药物的定量分析方法最为成熟，其中应用