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二级质谱同时定量定性及18o定量修正公式设计和验证
摘要
基于生物质谱技术(如基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱:
要的两大任务。本论文工作针对SPITC标记能够有效提高多肽的梯
度测序效率的特点,以及180标记可以方便快速获得定量信息的优点,
将两者有机结合完成了对多肽同时定性定量的测定。传统的方法在一
级质谱获取定量信息,在二级质谱中获取定性信息,而本研究提出的
新方法则在二级质谱中即可同时得到定量和定性信息。实验对比发现
新方法与传统方法得到的数据一致,因而只需一份二级质谱图就能很
好的诠释样品的定量和定性信息。该SPITC结合180标记进行的蛋白
质定量和定性的方法学在基因组未知的穴居狼蛛
样品中也能准确的完成定量和定性.,由此得到的定性信息对后续的蜘
蛛毒素或者其它的基因组未知样品的功能深入研究有重要指导意义。
在常用的同位素标记中,180同位素因其无污染、无需额外处理
且效率高而备受亲睐,但是在长期实验中发现180同位素标记其存在
“自然同位素峰干扰”和“180原子回交’’两大缺点。自然同位素干扰无
法消除,只能选择性回避,这会导致大量蛋白质得不到精确定量;180
原子回交是原子的自发运动,只能通过缩短标记和质谱鉴定这两步的
时间间隔、调节pH和温度等方法来降低回交速度,但无法完全杜绝。
本研究一改“以堵治水”的思路,与其竭力研究如何杜绝这两个因素的
影响,不如弄清是如何影响且影响的程度,因此针对这两个影响定量
的因素设计了修正公式,而且人为地设计180原子回交实验进行了验
证。该公式在目前的测试中表现出令人满意的效果。在后续的实验完
成后,该公式将改变人们对“自然同位素干扰”和“180原子回交”这两
个干扰因素的处理思路。
关键词:生物质谱,180,SPITC,蛋白质定量公式,蜘蛛粗毒
ABSTRACT
Therelative andidentification
quantification ofproteinsby
matrix—assistedlaser ionization mass
desorption time-of-flight
MS/MSare in
spectrometry(MALDI—-TOF--MS)and
veryimportant
researchandare conducted
protein usually
N-terminalderivatizationwith
4-sulphophenyl
facilitatesdenovo andaccurate
sequencinganalysis proteinidentification,
while
180 is and the
labelingsimple,specific
widelyapplicableamong
methodsusedfor
isotopic relative
labeling
inMS/MS could accurate
peaks spectrum provide quantitative
informationwhichis fromMS
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