大豆花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的制备与RT-LAMP检测.pdfVIP

大豆花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的制各及RT-LAMP检测 4．2．7单克隆抗体的大量制备………………………………………………………35 4．2．8胶体金免疫试纸条的制备……………………………………………………36 4．3结果与分析………………………………………………………………………．38 4．3．1大豆花叶病毒外壳蛋白原核表达载体的构建………………………………38 4．3．2大豆花叶病毒外壳蛋白原核表达……………………………………………39 4．3．3大豆花叶病毒抗血清的制备…………………………………………………39 4．3．4小鼠血清效价测定……………………………………………………………40 4．3．5杂交瘤细胞株的建立…………………………………………………………40 4．3．6单克隆抗体亚型的鉴定………………………………………………………41 4．3．7单克隆抗体的大量制备………………………………………………………42 4．3．8胶体金的制备…………………………………………………………………42 4．3．9抗体与胶体金用量的比例……………………………………………………43 4．3．10免疫试纸条的组装……………………………………………………………44 4．3．11免疫试纸条敏感性分析……………………………………………………．44 4．3．12免疫试纸条特异性分析……………………………………………………．45 4．3．1 3免疫试纸条检测大豆种子中的SMV………………………………………46 4．4讨论与结论………………………………………………………………………．46 第五章逆转录环介导等温扩增技术快速检测大豆花叶病毒………………………．49 5．1试验材料…………………………………………………………………………一51 5．2试验方法…………………………………………………………………………．52 5．2．1 引物设计………………………………………………………………………52 5．2．2总RNA提取…………………………………………………………………．52 5．2-3 5．2．4RT-LAMP检测田间样品及结果的可视化检测……………………………．54 5．2．5 5．3结果与分析………………………………………………………………………。55 5．3．1 5．3．2RT-LAMP反应条件的优化…………………………………………………．56 5．3．3 5．3．6 5．3．7 万方数据 目 录 5．4{寸论…………………………………………………………………………………………………………．61 5．5 结论…………………………………………………………………………………………………………．62 本论文结论与创新点………………………………． 参考文献……………………………………………………………………………………。65 附 录………………………………………………………………… 攻读硕士学位期间发表的论文和申请的专利……………………． ……。71 致{射…………………………………………………………… 万方数据 摘 要 大豆花叶病毒胶体金免疫层析试纸条 的制备及RT—LAMP检测 摘要 mosaic 大豆花叶病毒(Soybeanvirus，SMV)是一种在世界上很多国家广泛分布 并极具破坏性的植物病毒，会导致大豆严重减产和种质衰退，每年都给很多国家带来 巨大的经济损失，因此，建立一种快速检测SMV的方法对于检测和防控大豆花叶病 毒的发生与流行是十分必要的。 本研究建立了两种方法：一种为大豆花叶病毒一步免疫层析检测法，该方法利用 胶体金标记单克隆