基于定量PCR技术的AcNPV-CarE病毒液滴度.PDF

( ) 第 卷第 期 西 南 大 学 学 报 自然科学版 年 月 34 10 2012 10 ( ) Vol.34 No.10 JournalofSouthwestUniversit NaturalScienceEdition Oct. 2012 y 文章编号: ( ) 1673 9868201210 0041 07 基于定量PCR技术的AcNPV-CarE病毒液滴度 测定及酯酶表达条件优化① 1 2 1 李永强 , 袁国瑞 , 安凤秋 , 1 1 1 苏立德 , 冯俊涛 , 张 兴 / , ; 1.西北农林科技大学 无公害农药研究服务中心 陕西省生物农药工程技术研究中心 陕西 杨凌 712100 , 2.西南大学 植物保护学院 重庆 400716 : ( ) , 摘要 为了制备具有生物学功能的棉铃虫羧酸酯酶 CarEs体外表达产物 用于研究其对有机磷等化学杀虫剂的代 , ( ) 谢解毒作用 该文尝试将棉铃虫羧酸酯酶基因在草地夜蛾细胞系Sf9和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 AcNPV 为 , ( 载体的表达系统中进行表达 采用实时荧光定量 PCR技术测定棉铃虫羧酸酯酶基因和病毒载体重组体 AcNPV- ) , ( ) , CarE的病毒液滴度 并通过不同转染系数 MOI和不同收获时间下培养液中细胞体积单位变化趋势 以及表达 , 产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和 乙酸萘酯染色结果 优化了棉铃虫羧酸酯酶在 细胞中的最佳表达条 α Sf9 : ( ) 件 结果表明 重组病毒液 在 细胞中扩大培养至第三代以后的病毒液 和 滴度均在 . P1stock Sf9 P P stock 2× 3 4 8 / ; , , 6 /