青花菜花球及叶片中硫代葡萄糖苷组分及含量剖析.docVIP

青花菜花球及叶片中硫代葡萄糖苷组分及含量剖析 　　摘要：对12个青花菜（Brassica oleracea L. var. botryti L.）品种的花球及叶片中的硫苷含量及组成进行了分析测定，结果表明，青花菜中含有9种硫代葡萄糖苷，分别为3-甲基硫氧烯丙基硫苷（IBE）、2-羟基-3-丁烯基硫苷（PRO）、2-丙烯基硫苷（SIN）、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷（RAA）、3-丁烯基硫苷（NAP）、4-羟基吲哚基-3-甲基硫苷（4OH）、3-甲基吲哚基硫苷（GBC）、4-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷（4ME）、1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷（NEO）。青花菜花球中的硫苷含量是叶片中的1～5倍不等，不同品种之间存在差异性。RAA是青花菜中含量最多的硫苷组分。 　　关键词：青花菜；花球；叶片；硫代葡萄糖苷 　　中图分类号： S635.301 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0300-04 　　青花菜（Brassica oleracea L. var. botryti L.）属于十字花科芸薹属甘蓝种的变种，为一、二年生草本植物。硫代葡萄糖苷（glucosinolates，GLS，简称硫苷）是一类含硫化合物，是十字花科蔬菜中重要的次生代谢产物。所有的十字花科植物都能够合成硫代葡萄糖苷，硫代葡萄糖苷存在于这些植物的根、茎、叶、种子中[1]。由于侧链R 基团的不同，可把硫苷分为脂肪类、芳香类、吲哚类硫苷3类。硫代葡萄糖苷及其降解产物具有多种生物活性、化学活性，硫代葡萄糖苷已被证实与十字花科蔬菜的风味及营养成分、植物自我保护机制以及人类的身体健康有着密切关系。蔬菜在被食用或机械破碎时，其中所含的硫苷被内源芥子酶水解成多种具有生理活性的降解产物，产物之一的异硫氰酸酯能够有效预防癌症，尤其是膀胱癌、结肠癌和肺癌[2-4]。青花菜富含3-甲基硫氧烯丙基硫苷（glucoiberin）、4-甲基硫氧丁基硫苷（glucoraphanin）、3-甲基吲哚基硫苷（glucobrassicin）以及1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷（neoglucobrassicin）[5]。英国科学家已选育出高硫苷含量的青花菜新品种，该品种的抗癌能力是普通青花菜的80 倍[4，6]。不同蔬菜种类或同一蔬菜种类的不同品种、不同生长环境以及同一植株的不同生长阶段、同一植株的不同部位硫苷的含量及组分都存在差别[7-10]。本研究对我国市场上常见的12个青花菜品种的花球、叶片的硫苷含量及组成进行了测定，结合青花菜栽培性状及产量等进行分析，旨在对青花菜育种及副产物综合利用提供参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　供试的12个青花菜品种来自北京市农林科学院蔬菜研究中心（表1）。2013年2月1日播种，3月25日定植于北京市农林科学院蔬菜研究中心通州农场，采用露地直播方式，株距50 cm，行距 50 cm，重复3 次。7月24日取新鲜的花球及叶片测定硫苷含量。 　　1.2 方法 　　1.2.1 硫苷的提取[11] 取新鲜青花菜花球及叶片，分割成小球或小片，在真空冷冻干燥机内干燥。称量粉碎好的样品0.2 g，放入15 mL塑料管中。加入内标TRO（苯甲基硫苷）0.25 mL，迅速加入100%预热的甲醇，80 ℃下水浴20 min，每隔4～5 min涡旋振荡1次，3 000 r/min离心10 min，取上清液倒入15 mL塑料管中，放在冰盆中。沉淀物继续用70%甲醇提取2次，同上述处理方法，合并上清液，即为样品液。取一次性注射器，加入玻璃棉，塞紧，放在试管上。加入DEAE胶溶液2 mL，用2 mL双蒸水洗涤，加入样品液2 mL。待样品液不再滴下，加入0.02 mol/L NaAc溶液。待不再有液体滴下，将注射器转移到另一试管上，加入75 μL硫酸酯酶溶液，封口过夜。将过夜的注射器用双蒸水洗涤3次，每次 0.5 mL。用注射头挤压注射器，使液体尽可能转移到试管中。将试管中液体通过0.45 μm滤膜转移到小玻璃瓶中，冷冻保存，待用。 　　1.2.2 硫苷的分析 HPLC分析条件：Nova-Pak C18色谱柱：3.9 mm×150 mm，50 μm，检测波长229 nm，流速 1.0 mL/min，常温，进样量20 μL，梯度洗脱如表2所示。A液：1 g四甲基氯化铵（TMACl）溶于2 L双蒸水中，混匀，抽滤。B液：1 g四甲基氯化铵（TMACl）溶于1.6 L双蒸水中，加入400 mL色谱纯乙腈，混匀抽滤。 　　采用苯甲基硫苷作为内标，根据保留时间和峰面积测定硫苷组分。利用内标和响应因子计算硫苷含量，硫苷含量计算公式如下： 　　硫苷含量=脱硫硫苷峰面积×内标量×脱硫硫苷相对响应因子内标峰面积×试样质量。 　　2 结果与分