超高效液相色谱―串联质谱法剖析鸡蛋中利巴韦林及其代谢物残留.docVIP

超高效液相色谱―串联质谱法剖析鸡蛋中利巴韦林及其代谢物残留 　　摘要 建立了超高效液相色谱串联质谱法同时快速测定鸡蛋中利巴韦林及其两种主要代谢物TCONH2和RTCOOH的分析检测方法。样品采用乙腈水（9∶1， V/V）提取，乙腈饱和正己烷除脂，C18结合GCB进行固相分散萃取除杂，Agilent ZORBAX SBAq色谱柱（100 mm × 3.0 mm，1.8 μm）分离，超高效液相色谱串联质谱测定。结果表明：利巴韦林、TCONH2和RTCOOH分别在2.0～200 μg/L， 0.5～200 μg/L， 5.0～200 μg/L浓度范围内，线性良好，相关系数R20.99，检出限分别为0.54， 0.09和1.54 μg/L，定量限分别为1.79， 0.31和5.13 μg/L。在5.0，10.0和50.0 μg/L加标水平下，利巴韦林和RTCOOH回收率分别为96.1%～99.6%和42.9%～58.3%；在0.5，2.0和5.0 μg/L加标水平下，TCONH2的回收率为75.9%～106.7%，相对标准偏差均为4.2%～12.7%。实际样品测定结果表明，本方法操作简单、快速、准确，能够满足鸡蛋中利巴韦林及其两种主要代谢物的分析检测。 　　关键词 超高效液相色谱串联质谱； 利巴韦林及其代谢物； 鸡蛋 　　1引言 　　我国是禽蛋生产和消费大国，禽蛋产量多年来位居世界第一。禽类养殖过程中禽流感以及一些病毒性疾病一直是困扰养殖户的头等问题，为了减少损失，人用抗病毒药物利巴韦林曾被用于兽医临床用途。利巴韦林（1βDribofuranosyl1，2，4triazole3carboxamide）是一种人工合成的广谱抗病毒药物 [1 ]，在动物细胞内被迅速代谢为TCONH2（1，2，4triazole3carboxamide）和 RTCOOH（1βDribofuranosyl1，2，4triazole3carboxylic acid）等相关代谢产物 [2 ]，利巴韦林及其两种主要代谢物 　　图1利巴韦林、TCONH2和RTCOOH的化学结构式 　　Fig.1Chemical structures of ribavirin， 1，2，4triazole3carboxamide （TCONH2） and 1βDribofuranosyl1，24triazole3carboxylic acid （RTCOOH）化学结构式见图1。但利巴韦林具有一定的毒副作用，长期使用可使病毒产生不同程度的耐药性，诱导新型耐药病毒的出现，从而影响人类病毒疾病的防治，给人们的身体健康造成危害。因此，我国农业部于2005年发布第 [560 ]号公告，明确规定禁止在动物养殖过程中使用利巴韦林等人用抗病毒药物 [3 ]。产业调研发现，在我国禽类养殖过程中，违规使用利巴韦林等抗病毒性药物现象目前仍然十分严重，严重威胁禽类产品质量安全。因此有必要建立快速、准确、灵敏、高效的利巴韦林及其代谢物残留检测方法，为监管提供强有力的技术支撑。 　　目前，检测利巴韦林原型的方法有高效液相色谱法（HPLC） [4，5 ]、放射免疫法（RIA） [6 ]、毛细管电泳法（HPCE） [7 ]、液相色谱串联质谱法（HPLC/MS） [8～12 ]等，目标分析物主要涉及人血浆和动物源性食品。对于利巴韦林及其代谢物的检测，仅在动物血浆上有报道 [2 ]，鸡蛋中利巴韦林及其代谢物的残留检测尚无相关报道。本研究采用超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）测定鸡蛋中利巴韦林及其两种主要代谢物TCONH2和RTCOOH的残留量，比较了不同前处理方法，优化了超高效液相色谱和质谱条件，同时进行了方法学评估，并应用于阳性鸡蛋样品中3种残留物检测分析。本方法操作简单、快速、准确，能够满足鸡蛋中利巴韦林及其主要代谢物的残留检测。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　ACQUITY UPLC超高效液相色谱（美国Waters公司）；QTRAP 6500型三重四极杆线性离子阱复合质谱系统（美国AB SCIEX公司）；TTLDCII型氮气浓缩仪（北京同泰联科技发展有限公司）；MilliQ超纯水器（美国Millipore公司）。 　　利巴韦林标准品（德国Dr.Ehrenstorfer公司），纯度99.9%；13C5利巴韦林标准品（加拿大TRC公司），纯度99.9%；甲醇（HPLC级，德国MERCK公司）；甲酸、正己烷（HPLC级，美国MREDA公司）；乙腈（HPLC级，美国J.T.Baker公司）；实验用水为MilliQ超纯水。 　　生鲜鸡蛋为本实验所用鸡蛋均为实验饲养蛋鸡所产，其中给药组为对蛋鸡连续3天饲喂30 mg/kg利巴韦林原药，停药1， 2， 5和7天后采集的鸡蛋样品。