丹参素肾主动分泌的分子机制及提高其系统暴露水平方法的研究-中药学专业论文.docx

天津中医药大学博士学位论文 天津中医药大学博士学位论文 万方数据 万方数据 HYPERLINK \l _bookmark0 2 实验材料及实验设计 61 HYPERLINK \l _bookmark1 3 结果 61 HYPERLINK \l _bookmark2 4 小结 65 HYPERLINK \l _bookmark3 实验七 丹参素的肝肾毒性研究 67 HYPERLINK \l _bookmark4 1 引言 67 HYPERLINK \l _bookmark5 2 实验材料和实验设计 68 HYPERLINK \l _bookmark6 3 结果 69 HYPERLINK \l _bookmark7 4 小结 72 HYPERLINK \l _bookmark8 实验八 丹参素和传统西药的扩血管活性比较研究 74 HYPERLINK \l _bookmark9 1 引言 74 HYPERLINK \l _bookmark10 2 实验材料及实验设计 75 HYPERLINK \l _bookmark11 3 结果 76 HYPERLINK \l _bookmark12 4 小结 77 HYPERLINK \l _bookmark13 总结 78 HYPERLINK \l _bookmark14 参考文献 83 HYPERLINK \l _bookmark15 攻读学位期间发表论文情况 95 中文摘要 丹参素具有理想的药理活性及良好的药代属性，被认为是丹参（Salvia miltiorrhiza roots）治疗心绞痛的关键成分。前期研究表明肾排泄是丹参素的主要消除途径。本研究 阐述了丹参素肾主动分泌的分子机制以及探索能够有效、安全地提高丹参素系统暴露 水平的方法。 首先通过计算机辅助评价肾脏转运体 OAT1 和 OAT3 底物的理化性质，并预测转运 体 OAT1 和 OAT3 介导丹参素转运的可能性；运用体外实验筛选了能够转运丹参素的肾 脏转运体（摄取转运体 OAT1/Oat1 和 OAT3/Oat3 以及外排转运体 MRP2/Mrp2、 MRP4/Mrp4 和 BCRP/Bcrp），并评价了人与大鼠之间的种属差异。利用大鼠静脉给予 OATs/Oats 抑制剂丙磺舒而建立“化学敲除”的大鼠模型，以观察静脉给予丹参素或口 服丹参提取物后，丹参素在大鼠体内处置过程的变化。进而，基于单剂量爬坡实验和 肾脏毒性实验，探索能够安全有效的提高丹参素系统暴露水平的方法。 计算机辅助结果表明，丹参素可能是转运体 OAT1 的底物。体外筛选结果表明， 丹参素为摄取转运体 OAT1/Oat1 和 OAT3/Oat3 的底物，转运体 OAT1/Oat1 的活性远远 高于转运体 OAT3/Oat3；同时，转运体 OAT1/Oat1 和 OAT3/Oat3 介导的丹参素转运可 以被丙磺舒显著抑制（P 0.05）；转运动力学实验结果显示，肾小管对丹参素的摄取主 要由人转运体 OAT1 和大鼠转运体 Oat1 介导，米氏常数（Km）分别为 77 μM 和 117 μM； 同时，抑制动力学实验结果表明转运体 OAT1/Oat1 对丹参素的摄取可被丙磺舒竞争性 抑制，抑制常数（Ki）分别为 2.6 μM 和 3.1 μM，说明丙磺舒能够显著弱化肾小管 OAT1/Oat1 功能。进而利用丙磺舒建立“化学敲除”大鼠模型，发现经静脉给予丹参 素和口服丹参提取物后，丹参素的肾主动分泌 降低，系统暴露水平显著增加（ P 0.05）。单剂量爬坡实验表明丹参素在很宽的剂量范围内（2–200 mg/kg）具有线性药 代动力学特点；随着剂量的增加，丹参素的暴露水平（AUC0-∞）可以增加约 100 倍，并 且肾清除率不被饱和。虽然 Oats 介导的肾小管摄取可以导致肾脏中丹参素浓度远高于 血浆中浓度（10 倍），但是肾脏毒性实验显示，大鼠在连续静脉给予丹参素 14 天（200 mg/kg/day）后，肾小管和肾小球无明显病变。另外，与传统的 Ca2+通道拮抗剂比较， 丹参素抑制去甲肾上腺素预收缩的大鼠胸主动脉作用较弱(IC50，37 μM)，但其最大血 管扩张作用相当（Imax，103%）。 因此，丹参素的肾小管分泌机制包括：主要由 OAT1/Oat1 介导其从血中摄入，随后 1 通过被动扩散外排到管腔，最终排出到尿。丹参素在很宽的剂量范围内呈线性药代动力 学特征且几乎没有肾毒性。因此调整剂量是能够有效、安全地提高丹参素系统暴露的手 段。 关键词：丹参；丹参素；肾主动分泌；有机阴离子转运体；药物间相互作用 2 ABSTRACT Tanshinol, which has desirable ph