磁珠标记法测定T618I突变型hERG钾通道的电生理特征及其药物反应性-内科学(心血管)专业论文.docx

福建医科大学 福建医科大学 万方数据 万方数据 目 录 中文摘要-------------------------------------------------------------------------------------1 英文摘要-------------------------------------------------------------------------------------3 正文-------------------------------------------------------------------------------------------5 第一部分 磁珠标记法测定野生型 hERG 通道电流 5 材料与方法----------------------------------------------------------------------------5 结果-------------------------------------------------------------------------------------9 讨论------------------------------------------------------------------------------------17 第二部分 T618I 突变型 hERG 钾通道的电生理特征及其药物反应性 19 材料与方法---------------------------------------------------------------------------19 结果------------------------------------------------------------------------------------23 讨论------------------------------------------------------------------------------------42 参考文献------------------------------------------------------------------------------------45 综述------------------------------------------------------------------------------------------48 致谢------------------------------------------------------------------------------------------ 57 3 背景和目的： 中文摘要 比较野生型和 T618I 突变型 hERG 钾通道的电生理特性，并观察 T618I 突变 型 hERG 钾通道对多非利特的药物反应性，以进一步揭示短 QT 间期综合征的发病 基础，为其临床用药提供理论依据。 第一部分 磁珠标记法测定野生型 hERG 钾通道电流 方法： 利用免疫磁珠阳性标记法制作 hERG 钾通道表达系统，测定野生型 hERG 钾通 道的 I-V 曲线、稳态激活曲线、稳态失活曲线、灭活时间常数，评价该系统的应 用价值。 结果： 采用 35mm 平皿，2ug 质粒，5ul lipofectamine 转染试剂，在 48-72h 时细 胞阳性率可达 10~20%。记录野生型 hERG 钾通道电流在 20mV 时出现内向整流； 稳态激活曲线 V1/2 为-12.2±0.629 mV，斜率（k）为 11.8±0.587 mV；稳态失活 曲线 V1/2 为-11.9±2.75 mV，斜率（k）为 19.0±1.75 mV；灭活时间常数在 10mV 后随电压升高而降低；动作电位钳刺激时，当电压为-40mV 时电流达峰值。 结论： 1.细胞最佳的转染配比为 2ug 质粒，5ul lipofectamine 转染试剂。 2.所记录 hERG 钾通道电流较典型，稳态激活和稳态失活均符合波尔兹曼方 程。 3.灭活时间常数及动作电位 I-V 曲线均显示为典型的野生型 hERG 通道电流。 第二部分 T618I 突变型 hERG 钾通道的电生理特征 方法： 及其药物反应性 利用免疫磁珠阳性标记表达系统记录 T618I 突变型 hERG 钾通道电流，比较 其与野生型电流的区别，揭示其导致心律失常的机制，观察其对多非利特的药物 反应性。 结果： T618I 突变型 hERG 钾通道刺激电压在 60-70 mV 时出现不稳定，在 8