粗毛褐孔菌化学成分及质量控制研究-药物化学专业论文.docxVIP

5.2.11 样品含量测定 21 5.2.12 粗毛褐孔菌多糖水解液的 TLC 鉴别 22 结 语 23 参考文献 24 图 谱 25 附 录 41 致 谢 55 查新报告 56 发表文章 1 63 发表文章 2 68 PAGE PAGE 1 引 言 粗毛褐孔菌（Xanthochrous hispidus (Bull.exfr.)Pat.）是多孔菌科褐孔菌属 药用真菌，民间多用于肿瘤疾病的治疗。初步药理预试证明粗毛褐孔菌有增强机体免 疫力的作用，相关的类似药物研究报道较多[1]，但未见有关粗毛褐孔菌研究的报道。 为了综合开发利用该药材，对粗毛褐孔菌的化学成分分离分析,寻找抗肿瘤的有效物 质基础，进而制定药材的质量标准显得十分必要。 本课题对粗毛褐孔菌的乙醇提取物进行了化学成分的系统分离，经硅胶柱层析、 制备薄层、大孔树脂柱反复层析，Sephadex LH-20 纯化，得到 8 个化合物，经理化性 质测定、光谱分析及对照品薄层对照，分别鉴定为：羊毛甾二烯二醇（Ⅰ）、麦角甾 醇（Ⅱ）、齿孔酸（Ⅲ）、麦角甾醇－5，8－过氧化物（Ⅳ）、D-阿拉伯糖醇（Ⅴ）、棕 榈酸（Ⅵ）、十八烷酸（Ⅶ）、D-葡萄糖（Ⅷ）。各化合物均系首次从该药材中获得。 它们的结构见表１。 表 1 分离得到的化合物 编号 名称 结构 鉴定方法 羊毛甾二烯二醇 Ⅰ 3β, 22 – dihydroxy – lanosta - 8,24-diene HO  OH 1HNMR，13CNMR 麦角甾醇 Ⅱ Ergosterol 1HNMR，13CNMR UV HO 齿孔酸 Ⅲ Eburicoic acid HOOC H H HO  1HNMR，13CNMR 对照品对照 麦角甾醇－5，8－过氧化物 Ⅳ Ergosterol-5,8-peroxide  对照品对照 D-阿拉伯糖醇 Ⅴ D-Arabitol 棕榈酸 Ⅵ Hexadecoic acid 十八烷酸 Ⅶ Octadecanoic acid HO O O CH2OH HO OH OH CH2OH CH3(CH2)14COOH CH3(CH2)16COOH  1HNMR，13CNMR MS 对照品对照 IR MS 对照品对照 D-葡萄糖 Ⅷ D-glucose CHOH O OH OH OH OH  IR 对照品对照 实验研究 1 仪器和试剂 X4 型显微熔点测定仪（温度计未校正） FA1104 型电子分析天平 Nicolet 750 傅立叶红外光谱仪 UV265 紫外分光光度计 UV3010 紫外分光光度计 721 可见分光光度计 AVANCE 400 型核磁共振波谱仪 DT-100 分析天平 ES-J120 电子天平 HHSY21-NIZ 电热恒温水浴锅 Agilent1100 高效液相色谱系统 QC225 超声波清洗器(上海超声波仪器厂) 烧杯、三角瓶、容量瓶、打孔器、微量进样器 薄层层析用硅胶为青岛海洋化工有限公司产品，柱层析用硅胶（100～200 目） 为青岛化学试剂厂产品，大孔树脂为 D101 型，为天津海光化工有限公司产品。HPLC 所用色谱甲醇为天津四友精细化学品有限公司产品，纯净水为二次蒸馏水，其余所用 试剂均为分析纯。 粗毛褐孔菌由山东省沂南县真菌研究所提供，经鉴定为多孔菌科褐孔菌属粗毛褐 孔菌 Xanthochrous hispidus (Bull.exfr.)Pat.。 无水葡萄糖对照品购于中国药品生物制品检定所，批号为 0833-9501。麦角甾醇 －5，8－过氧化物对照品由山东中医药大学药学院提供，齿孔酸、棕榈酸、十八烷酸 对照品由北京中医药大学药学院提供。 2 提取与分离 粗毛褐孔菌药材 2.5kg，粉碎，用 5 倍量 95%乙醇回流提取三次，每次 3 小时， 合并提取液，减压回收溶剂，抽滤出沉淀物（50g）,滤液浓缩为浸膏。浸膏中拌入 50g 柱层析用硅胶后减压干燥并粉碎，分别用石油醚、乙酸乙酯、甲醇索氏提取，回 收溶剂后得石油醚提取物 12g，乙酸乙酯提取物 20g（乙酸乙酯提取液回收前放冷后 底部出现不溶液体，将其吸入小三角瓶中另置），甲醇提取物 150g。将甲醇提取物溶 于热水后用正丁醇萃取得正丁醇萃取物 5g，水层蒸干得浸膏 120g。 石油醚提取物硅胶拌样，真空干燥箱干燥，硅胶柱层析分离，石油醚-乙酸乙酯 梯度洗脱，得到 1 个组分是石油醚-乙酸乙酯 157～191 流份。该流份经薄层制备得到 2 个白色片状固体Ⅵ和Ⅶ。 回收乙醇出现的沉淀物硅胶拌样，真空干燥箱干燥，硅胶柱层析分离，石油醚- 乙酸乙酯梯度洗脱，得化合物Ⅲ（50mg，为石油醚—乙酸乙酯 13～40 流份）。 乙酸乙酯提取物硅胶拌样，真空干燥箱干燥，硅胶柱层析分离，石油醚