鸭疫里默氏杆菌血清型鉴定及耐药性剖析.docVIP

鸭疫里默氏杆菌血清型鉴定及耐药性剖析 　　摘要：从泰州地区疑似鸭疫里默氏杆菌感染鸭场采集病料，经细菌分离培养得到2株菌株，通过细菌形态、培养特性、生化试验等方法鉴定为鸭疫里默氏杆菌，分别命名为TY1株和TY2株。采用玻片凝集试验对2个分离株进行血清型鉴定、K-B 纸片扩散法进行12种常用抗菌药物的药敏试验，结果显示，TY1和TY2株均为血清1型，对头孢吡肟、环丙沙星高度敏感，对复方新诺明、阿米卡星、庆大霉素、青霉素、链霉素、阿奇霉素、林可霉素、利福平耐药。 　　关键词：鸭疫里默氏杆菌；血清型；鉴定；药敏试验 　　中图分类号： S858.322.61文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0168-02 　　收稿日期：2013-05-09 　　基金项目：江苏省高等学校大学生实践创新训练计划（编号：2012JSSPITP3463）；江苏农牧科技职业学院科技资助项目（编号：YB1204）。 　　作者简介：蔡丙严（1980―），男，河南濮阳人，硕士，讲师，主要从事动物防疫与检疫专业的教学及科研工作。E-mail：caibingyan20@163.com。鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）是一种革兰氏阴性、无鞭毛、无芽孢的棒状杆菌，瑞氏染色呈两极着色。鸭疫里默氏杆菌所引起的传染病称为鸭传染性浆膜炎，该病呈世界范围分布，给养鸭业带来了巨大的经济损失[1]。 　　RA对营养要求较高，在普通营养琼脂和麦康凯琼脂上不生长，在胰酶大豆琼脂（TSA）、血液琼脂、巧克力琼脂上生长良好。RA在初次分离培养时对CO2依赖性强，一般在烛罐或CO2培养箱中，提高CO2浓度和湿度，37 ℃培养 48～72 h，RA生长最佳[2]。RA血清型众多且非常复杂，现在国际上报道的血清型共有21 种，其中优势血清型为 1 型和 2 型[3]，在我国，程安春等在此基础上又发现了4 个新的血清型[4]。血清型的复杂及血清型之间无交叉保护力给此病的防治带来极大的困难，多年来，由于生产上盲目用药、滥用药或超剂量用药，RA对各种抗生素均产生不同程度的耐药性，尤其对喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素的耐药性非常普遍，耐药率极高，耐药情况复杂，并且来自同一群不同株对同一药物敏感性有差异的情况非常普遍[5-6]。 　　从江苏泰州周边地区2个规模养鸭场临床疑似鸭疫里默氏杆菌感染的病死鸭中，进行病原分离和血清型鉴定，并且对分离菌株进行药敏试验，为切实做好该病的防治工作提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1病料来源2013年3月，从泰州周边地区获得临床具有典型鸭疫里默氏杆菌感染的病死鸭，从病死鸭的脑、心血、肝脏中分离获得2株菌株，分别命名为TY1、TY2。 　　1.1.2培养基胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA，批号：2107469）、胰蛋白酶大豆肉汤培养基（TSB，批号：2191068），均购自碧迪医疗器械（上海）有限公司；麦康凯琼脂培养基（批号：12075）、普通琼脂培养基（批号：120909），均购自杭州天和微生物试剂有限公司。 　　1.1.3药品阿莫西林、庆大霉素、环丙沙星、多西环素、头孢吡肟、阿米卡星、复方新诺明、青霉素、链霉素、阿奇霉素、林可霉素、利福平等12种药敏试纸（批号，购自杭州天和微生物试剂有限公司。 　　1.1.4试剂革兰氏染液、瑞氏染液、微量生化发酵管，均购自杭州天和微生物试剂有限公司；犊牛血清，购自浙江天航生物科技有限公司；鸭疫里默氏杆菌1～10型阳性血清，购自中国兽医药品监察所。 　　1.2方法 　　1.2.1细菌分离培养与形态观察无菌采取病死鸭脑、心血、肝脏等病料，分别接种于普通琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、巧克力琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基平板上，置37 ℃、5% CO2培养箱中培养 48 h。观察菌落形态，挑取单个疑似菌落涂片，革兰氏染色和瑞氏染色镜检，纯培养后，以40%甘油生理盐水于-70 ℃保存备用。 　　1.2.2生化试验挑取TSA 琼脂培养基、鲜血琼脂培养基平板上纯化的疑似 RA 菌株，按 Edwards PR 的方法用接种环在超净台将菌落接种于乳糖、半乳糖、蕈糖、果糖、蔗糖、棉子糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇、枸橼酸盐、H2S、M-R、V-P 尿素酶、吲哚等生化培养基上，继续培养 48～72 h 观察试验结果。 　　1.2.3血清型鉴定将纯化培养的分离菌株在含有5%犊牛血清的 TSA 培养基上，37 ℃、5% CO2培养箱中培养36 h。取1滴标准阳性血清滴于干净玻片上，挑取少量菌落混匀于标准阳性血清中，静置片刻观察玻片凝集结果。 　　1.2.4药敏试验采用K-B纸片扩散法，将保存的2