非小细胞肺癌的EGFR基因突变与扩增状况及信号传导蛋白AKT、ERK、STAT磷酸化表达-外科学(胸心外)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目录 中文摘要 错误!未定义书签。 英文摘要 3 缩略词简表 5 第一章 前 言 6 第二章 实验内容 9 1 标本来源与处理 9 1.1 标本来源 9 1.2 标本处理 9 2 EGFR 基因 19、21 外显子突变检测 9 2.1 主要试剂与仪器 9 2.1.1 主要实验试剂及仪器 9 2.1.2 常用溶剂的配置 10 2.2 石蜡组织 DNA 抽提 10 2.3 聚合酶链反应(PCR)进行 EGFR 基因扩增 11 PCR 引物设计 11 PCR 扩增 12 PCR 产物电泳 13 PCR 产物纯化 13 2.3.5 PCR 产物片段测序反应 13 2.3.6 ABI 测序仪测序及判读 14 3 EGRR 基因扩增检测 14 3.1 FISH 检测的原理 14 3.2 主要试剂及仪器 14 3.2.1 主要实验试剂及仪器 14 3.2.2 FISH 检测常用试剂配置方法 15 3.3 实验方法与步骤 16 3.3.1 石蜡切片预处理 16 3.3.2 杂交仪变性杂交 16 3.3.3 石蜡切片洗涤与观察 16 3.3.4 结果判断标准 17 4 EliVisionTM plus 两步法免疫组织化学染色检测 p-Akt、p-ERK1/2 和 p-STAT3 的表达 18 4.1 免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IHC）的原理 18 4.2 主要试剂及仪器 18 4.2.1 主要实验试剂及仪器 18 4.2.2 主要实验试剂的配置 19 4.3 实验方法与步骤 19 4.4 结果判断 21 5 统计学处理 21 HYPERLINK \l _bookmark0 第三章 结 果 22 HYPERLINK \l _bookmark1 1 临床资料 22 2 EGFR 基因突变与扩增状况 23 III 2.1 EGFR 基因外显子 19、21 突变的检出状况 23 2.2 EGFR 基因外显子 19、21 突变与临床病理特征之间的关系 25 2.3 EGFR 基因扩增检出状况 27 2.3.1 EGFR 基因扩增状况结果分析标准 27 2.3.2 EGFR 基因扩增状况检测结果 31 2.4 EGFR 基因扩增与临床病理特征之间的关系 31 2.5 EGFR 基因突变与扩增的相关性分析 33 3 EGFR 下游通路蛋白磷酸化检测状况 错误!未定义书签。 3.1 磷酸化信号传导蛋白的表达状况 错误!未定义书签。 3.1.1 磷酸化信号传导蛋白的光镜表现 错误!未定义书签。 3.1.2 磷酸化信号传导蛋白的阳性表达状况 错误!未定义书签。 3.2 AKT 蛋白磷酸化的表达与临床病理特征的关系 41 3.3 ERK1/2 蛋白磷酸化的表达与临床因素的关系 43 3.4 STAT3 蛋白磷酸化的表达与临床因素的关系 45 4 EGFR 基因状态与信号通路蛋白磷酸化的关系 47 4.1 EGFR 突变与信号通路蛋白磷酸化的关系 47 4.2 EGFR 基因扩增与信号通路蛋白磷酸化的关系 48 第四章 讨 论 49 1 EGFR 基因突变 50 1.1 EGFR 基因突变的类型 50 1.2 EGFR 基因的突变率 52 1.3 EGFR 基因突变与临床病理特征的关系 52 2 EGFR 基因扩增 54 3 EGFR 下游信号通路蛋白的磷酸化 56 3.1 AKT 蛋白磷酸化表达 56 3.2 ERK1/2 蛋白磷酸化表达 57 3.3 STAT3 蛋白磷酸化表达 58 3.4 EGFR 基因突变与扩增和下游信号通路蛋白磷酸化表达的关系 58 HYPERLINK \l _bookmark11 第五章 结 论 60 HYPERLINK \l _bookmark11 参考文献 61 HYPERLINK \l _bookmark11 综述 69 博士学业期间取得的主要成绩 HYPERLINK \l _bookmark11 84 HYPERLINK \l _bookmark11 致谢 85 IV 图表目录 表格目录 表 1 EGFR 基因外显子 19、21 突变检测 PCR 引物序列 错误!未定义书签。 HYPERLINK \l _bookmark2 表 2 临床资料 22 HYPERLINK \l _bookmark3 表 3 NSCLC 患者 EGFR 酪氨酸激酶域的体细胞突变 23 HYPERLINK \l _bo