沉默ADAM10基因后Hela细胞生物学活性的改变及其可能作用机制的分析-生物化学与分子生物学专业论文.docx

主要缩写词 ADAM TNF-a a disintegrin and metalloprtease Tumor Necrosis Factor –a 去整合素金属蛋白酶 肿瘤坏死因子-a EGFR MTT epidermal growth factor receptor methylthiazoletrazolium 表皮生长因受体 四噻唑蓝 DMSO DEPC PMSF Tween 20 dimethyl sulfoxide diethyl pyrocarbonate Phenylmethanesulfonyl fluoride polyethylene glycol sorbitan monolaurate 二甲基亚砜 二乙基焦碳酸二乙酯 苯甲基磺酰氟 吐温-20 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 Acr EDTA PBS Real-time PCR Tris NC 膜 Acrylamide ethylene diamine tetracetic acid phosphate-buffered saline Real-time Polymerase Chain Reaction Trihydroxymethylaminomethane nitrocellulose filter membrane 丙烯酰胺 乙二胺四乙酸 磷酸盐缓冲液 实时荧光定量 PCR 三羟甲基氨基甲烷 硝酸纤维素膜 NP-40 nonyl phenoxypolyethoxylethanol-40 乙基苯基聚乙二醇 AP Ammonium persulfate 过硫酸铵 TEMED N,N,N,N-Tetramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 沉默 ADAM10 基因后 Hela 细胞生物学活性的改变 及其可能作用机制的研究 中文摘要 本实验研究课题以人宫颈癌细胞株 Hela 为研究载体，将 ADAM10 干扰质粒转 染进入 Hela 细胞中，通过筛选获得稳定转染的 Hela 细胞 ADAM10 基因沉默细胞系， 从而研究 Hela 细胞 ADAM10 基因沉默前后细胞活性的改变。 目的：通过研究 ADAM10 基因沉默前后的 Hela 细胞活性的改变，找出 ADAM10 基因引起肿瘤细胞增殖，迁移的作用靶点与可能作用机制，为进一步的以 ADAM10 为核心的肿瘤治疗提供更多可靠依据。 方法：制备可供转染的高纯度环状干扰质粒；荧光显微镜观测转染效率； Real-time PCR 检测 ADAM10 基因表达；Western blotting 检测 ADAM10 蛋白表达水 平；MTT 法比较沉默前后 Hela 细胞增殖的变化；Transwell 细胞侵袭实验；流式细 胞计数法检测细胞周期变化；Real-time PCR 检测 CD44、CD44v6、CyclinA1； CyclinD1；Western blotting 检测 ERK、P-ERK。 结果：转染后得到 ADAM10 沉默细胞系，几乎不表达 ADAM10 蛋白；MTT 法显示沉默前后细胞增殖有显著性差异；Transwell 实验结果显示沉默前后细胞侵袭 有显著性差异；流式细胞计数显示沉默 ADAM10 基因后 Hela 细胞发生 G1 期阻滞； 沉默 ADAM10 基因后 CD44 基因表达无显著性差异，CD44v6 基因表达下调， CyclinA1 无显著性变化，CyclinD1 表达下调；沉默 ADAM10 基因后 Western blotting 显示 ERK 表达无显著性差异，P-ERK 表达下调。 结论： 1. Hela 细胞中 ADAM10 蛋白表达水平可以影响 CD44v6 的基因表达 2. 沉默 ADAM10 基因后细胞的侵袭性显著性降低，可能是通过 ADAM10 蛋白表 达水平影响 CD44v6 的基因表达。 3. 沉默 ADAM10 基因后 Hela 细胞出现 G1 期阻滞，细胞增殖速率降低 4. 沉默 ADAM10 基因后 Hela 细胞出现 G1 期阻滞，其机制可能与 ADAM10 调节 细胞信号 Ras 通路，引起 P-ERK 表达下降有关。 关键词： ADAM10；CD44v6；侵袭；G1 期阻滞；P-ERK The potential mechanism of the alteration of the cancer cell activity when knockdown of ADAM10 in Hela cells Abstract In this science study,we used Hela cells as the object of study,and we transf