防御素-3基因转染牙周膜及骨髓基质细胞的初步研究-口腔医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学 术 诚 信 承 诺 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作 及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得佳木斯大 学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对 本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 签名： 日期： 关于论文使用授权的说明 本人完全了解佳木斯大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文 的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 （保密的论文在解密后应遵循此规定） 签名： 导师签名： 日期： 目 录 一、摘要 1 二、Abstract 2 三、前言 3 四、文献综述 4 五、材料与方法 10 六、结果 18 七、讨论 30 八、结论 33 九、参考文献 34 十、致谢 38 十一、英文缩写 40 十二、攻读学位期间发表的学术成果 41 十三、附图 42 佳木斯大学口腔医学硕士专业学位论文 摘 要 目的：hBDs（human beta-defensin，hBD）是一种人体重要的抵御细菌感染的内源 性物质，其不仅表达在呼吸道、生殖上皮细胞、成年人心脏、骨骼肌、胎儿胸腺、食 道、气管和胎盘膜中，而且在人类口腔中的表达也有重要的意义。近些年来，对人防御 素β在人口腔中的作用及抑菌机制的研究也取得了较大的进展，通过这些研究，我们可 以探索治疗口腔疾病的新道路。 材 料 及 方 法 ： 本 实 验 为 了 研 究 人 牙 周 膜 细 胞 (human periodontal ligament cells, hPDLCs)和人骨髓间充质细胞 (human bone marrow mesenchymal cells, hBMCs)被包含人 防御素-3（human β-defensin 3, hBD-3）基因的慢病毒转染后，其转染效率及成骨情况。 通过助转染剂（polybrene）将包含目的基因和绿色荧光蛋白（green fluorescence protein, GFP）基因的慢病毒转染入人牙周膜细胞和人骨髓间充质细胞，而后通过 PCR 和 western blot 检验是否能正常表达 hBD-3，通过绿色荧光显微镜计数并计算转染效率。同 时使用碱性磷酸酶和茜素红染色来检测细胞的成骨潜能。 结果：包含有 hBD-3 基因和绿色荧光基因的慢病毒对 hBMCs 和 hPDLCs 的转染效 率分别达到 44.44%和 28.98%。仅包含有绿色荧光基因的慢病毒对 hBMCs 和 hPDLCs 的转染效率分别达到 79.94%和 31.71%。 结论：人牙周膜细胞和人骨髓间充质细胞被含有 hBD-3 基因的慢病毒转染后，可 作为促使牙周组织再生的理想的种子细胞。经检测发现，被转染后的细胞仍旧具有成骨 能力。 关键词：hBDs；蛋白质；口腔；疾病；小分子肽 Study on modified human periodontal ligament cells and human bone marrow mesenchymal cells by hBD-3 - 1 - Abstract Objective ： Human beta-defensin (hBD) is an important substance to resist bacterial infection. It not only expressed in respiratory tract, reproductive epithelium, adult heart, skeletal muscle, fetal thymus, esophagus, trachea and placental membrane, but also in the human oral cavity. Recently, the research on human beta defensin in the human oral cavity have made great progress. Through these studies, we can explore new path for the treatment of oral diseases. Methods：After the genes of hBD-3 and GFP transferred into the cells, the polymerase chain reaction assay and western blot assay have b