非小细胞肺癌患者尿蛋白质组的差异表达分析-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医 天津医科大学硕士学位论文 目的： 中文摘要 肺癌在发达国家已成为癌症死亡的主要原因[1]，而其中非小细胞肺癌（non small cell lung cancer NSCLC）约占肺癌总数的 80%。尽管不断改善肺癌的各种 诊断和治疗方法，但 60%非小细胞肺癌患者在接受治疗时已处于晚期[2]。其 5 年 生存率不超过 10%，然而Ⅰ期非小细胞肺癌的 5 年生存率却高达 70%[3]。故早期 诊断是非小细胞肺癌治疗成功的一个关键因素，只有通过早期诊断后选择优化 的治疗方案，才能增加 NSCLC 患者的治愈成功率。因此，寻找早期非小细胞肺 癌临床筛查方法和手段尤为重要。 尿液是除血浆之外另一种寻找潜在疾病生物标志物的重要生物材料。虽然 尿液蛋白质的表现主要反映在泌尿生殖系统疾病,多数研究也局限于肾脏和泌 尿道病变。但最近数据表明，尿液蛋白质组学分析也可高度信息化的表达在其 他非泌尿系统疾病中，并将有可能应用于这些疾病的临床。又因临床上能够简 便、无创伤的获得大量尿液标本，因此尿液蛋白质组学研究日益受到重视[4]。鉴 于尿液蛋白质组成成分和功能研究可能对某些疾病，特别是肿瘤性疾病的发生、 诊断、预防和治疗有很大意义，所以本研究分析比较了健康人、肺部良性病变 与非小细胞肺癌患者的尿液蛋白质组表达，以寻找差异表达蛋白质，从而发现 可用于非小细胞肺癌早期筛查、监测预后和治疗评估的生物标记物。最后，期 望能达到针对非小细胞肺癌患者寻找一个强有力的早期筛查方法，以提高早期 非小细胞肺癌确诊率的目的。 方法： 本研究以200000×g 超高速离心沉淀法进行非肿瘤组和非小细胞肺癌患者组 的尿液样本分离，提取其尿液蛋白质，并运用0.9% 1D SDS对部分尿液蛋 白质进行再分离后分组。对凝胶条带脱色、还原及烷基化、选取目标胶带，应 用乙腈、胰蛋白酶进行蛋白质凝胶内消化和萃取。消化后的蛋白质及肽段混合 物进一步使用 MS-Thermo-Orbitrap-Velos 分析仪对蛋白质及肽段逐一予以鉴定识 别，所得质谱数据应用 MASCO 软件通过 NCBI-Human 数据库进行数据分析， 鉴定提取出尿液中所包含的所有蛋白质。同时，通过数据搜索和分析得到相关 差异表达蛋白质，初步确定出非小细胞肺癌早期筛查的候选生物学标记物。最 后，选取临床病理证实的10例 NSCLC 患者和10例非肿瘤人群的尿液样本进行实 I 验验证，以明确所选非小细胞肺癌候选生物标记物的敏感性和特异性。从而最 终确定出与临床 NSCLC 相关的生物学标志物以及进行临床筛查和诊断的优化模 式。 结果： 非小细胞肺癌患者组和非肿瘤组尿液蛋白质在 0.9% 1D SDS中差异 性表达主要集中表现于 90kDa、60kDa 和 20kDa-30kDa 凝胶条带中。非小细胞 肺癌组鉴定出蛋白质数 1194-2813，平均值 2001±363.1；对照组鉴定出蛋白质数 1313-2740，平均值 1967±505.0。其中在 NSCLC 患者尿液蛋白质中确定出 4 种 差异表达蛋白质，包括上调蛋白 LRG1、CA1 和下调蛋白 VPS4B、YWHAZ。而 这四种差异表达蛋白在作为非小细胞肺癌独立生物标记物筛查模式时，其敏感 性较低，但采用这 4 种差异蛋白质组合筛查模式对 NSCLC 进行筛查和诊断，其 敏感性得到明显提高。 结论： 1、尿液是一种携带有多种蛋白质、多肽和氨基酸的生物流体，并且因尿液 蛋白质检测具有取材容易、无损伤、灵敏、特异等优点。因此，检测尿液蛋白 质组成，对肿瘤性疾病的早期诊断、疾病进程及预后判断具有重要价值。 2、在非小细胞肺癌患者尿液蛋白质分析中 LRG1、CA1 蛋白质的表达与 NSCLC 发生、发展呈正相关，而 VPS4B、YWHAZ 蛋白质的表达与 NSCLC 发 生、