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粗山羊草高分子量麦谷蛋白亚基的鉴定及基因克隆-生物化学与分子生物学专业论文
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到,本声明的法律结果由本人承担。
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学位论文作者签名: 指导教师签名:
日期: 年 月 日 日期: 年 月 日
I
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摘 要
高分子量麦谷蛋白亚基(high molecular weight glutenin subunit,HMW-GS)是小 麦籽粒贮藏蛋白的重要组分,其组成和数量直接影响和决定着小麦的加工品质。粗 山羊草(Aegilops tauschii Coss.,DD)编码的 HMW-GS 等位变异比普通小麦(Triticum aestivum L.,AABBDD)D 基因组编码的变异类型更为丰富。因此,发掘粗山羊草中 优异 HMW-GS 等位基因,分析它们与普通小麦中的 HMW-GS 之间的分子差异,在 普通小麦品质育种上有重要的理论和应用价值。
本文应用 SDS分析了 47 份粗山羊草 Glu-D1 位点的 HMW-GS 组成,发现 了 1 个新的 x-型亚基 1Dx1.1t。从电泳迁移率推测,它是目前在粗山羊草中发现的分 子量最大的亚基。
测序结果表明,1Dx1.1t 亚基基因全长编码区有 2,628 个核苷酸,其推导的亚基 蛋白由 874 氨基酸残基组成。亚基的特征结构域包括:由 21 个氨基酸残基组成的信 号肽、由 86 个残基组成的 N-端保守区和 42 个残基组成的 C-端保守区,以及一个长 的含有 725 个残基的中央重复区。这是目前所报道的粗山羊草 HMW-GS 中重复区最 长的亚基。 1Dx1.1t 亚基重复区主要由 75 个六肽( PGQGQQ )、 19 个九肽
(GYYPTSLQQ)和 26 个三肽(GQQ)重复基序组成;另外,亚基的重复区起始端
还包含 1 个十一肽(SYYPGQASPQR)和十二肽(RYYPSVTSPQQV)的氨基酸序
列,而重复区末端有 1 个三肽(GYY)序列。
将 1Dx1.1t 亚基与其他 13 个已报道的 D 基因组编码的 x-型 HMW-GS 进行序列 比较及聚类分析。结果显示,1Dx1.1t 亚基信号肽第 7 位的亮氨酸被组氨酸代替;亚 基的 N-端第 38 位有一个三肽的缺失,导致其 N-端仅由 86 个残基组成;而 C-端的第 839 位的缬氨酸被丙氨酸替代;1Dx1.1t 亚基重复区有单个氨基酸的替换和缺失,出 现了多处肽模块的插入、缺失和复制增加。聚类分析显示 1Dx1.1t 亚基与 1Dx5、1Dx2、 1Dx2t 亚基之间亲缘关系最近。
本研究结果表明,对 1Dx1.1t 亚基在普通小麦品质改良的利用价值需要深入研 究。
关键词:粗山羊草,高分子量麦谷蛋白,新等位基因,基因克隆,序列分析
II
II
Abstract
The high-molecular-weight glutenin subunits (HMW-GS) are one group of the major components of storage proteins in wheat seeds, whose variation in the amount and composition would affect and determine the flour processing properties. As the D genome donor to common wheat (Triticum aestivum L.), the heredity types of HMW-GS encoded by Aegilops tauschii are much richer than those in wheat. It would be significant for wheat quality improvement program if novel types of HMW-GS could be found in this wild relative and the
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