来源于欧文氏杆菌CXJZ95-198的.PDFVIP

中国农学通报 2015,31(10):240-245 Chinese Agricultural Science Bulletin 来源于欧文氏杆菌CXJZ95-198的 β-甘露聚糖酶基因高效表达体系构建 成莉凤，冯湘沅，段盛文，郑 科，刘正初 （中国农业科学院麻类研究所，长沙410205 ） 摘 要：旨在构建β-甘露聚糖酶基因的高效表达体系。从原基因工程菌株slp-man-pET28a/JM 提取重组 质粒slp-man-pET28a ，转化EscherichiacoliBL21(DE3) 。用水解圈大小，β-甘露聚糖酶活力高低和天然 半纤维素底物降解能力等综合指标衡量新基因工程菌株的β-甘露聚糖酶表达效果。新基因工程菌株 slp-man- pET28a/BL 在选择平板上能产生明显的水解圈，其分泌的β- 甘露聚糖酶活性最高达 645.5 U/mL ，是原基因工程菌株slp-man-pET28a/JM 分泌的1.28 倍，是出发菌株Erwinia carotovora CXJZ95- 198 分泌的1.97 倍；新基因工程菌株在苎麻原料发酵液的COD 净增加值达5.13 g/L 左右，分别 为原基因工程菌株和出发菌株净增值的1.5、1.2 倍；其还原糖生成量为0.721 mg/mL ，比原基因工程菌株 和出发菌株分别提高了26.7%和10.1% 。新基因工程菌株的β-甘露聚糖酶分泌量大幅度提高，可为麻类 生物脱胶β-甘露聚糖酶制剂制备提供科学依据。 关键词：麻类脱胶；β-甘露聚糖酶；表达体系；启动子 中图分类号：Q939.97 文献标志码：A 论文编号：cas ConstructionofHighEfficientExpressionSystemofthe β-mannanaseGenefromErwiniacarotovoraCXJZ95-198 ChengLifeng,FengXiangyuan,DuanShengwen,ZhengKe,LiuZhengchu (InstituteofBastFiberCrops,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Changsha410205) Abstract: Highefficientexpressionsystemoftheβ-mannanasegenewasbuilt.Recombinantplasmid slp- man-pET28awasextractedfromthegeneticengineeringstrainslp-man-pET28a/JM,andthentransformedto E.coli BL21 (DE3).β-mannanaseofthenewgeneticengineeringstrainwastestedbycomparinghydrolysis circle,determinationof β-mannanaseactivityanddegradationeffectofthenaturalhemi-cellulose.New geneticengineeringstrain slp-man-pET28a/BLproducedsignificanthydrolysiscirclesinselectivemedium, andsecretedβ-mannanaseupto 645.5 U/mL,as 1.28 timesand 1.97 timesasthatofgeneticengineering strainslp-man-pET28a/JMandoriginalstrains E.carotovora CXJZ95-198,respectively.CODvalueofthe fermentedliquidinramierawmaterialbythenewgeneticengineeringstrainincreasedby 5.13g/L,as 1.