抗生素的活性PT课件.pptVIP

* 抗生素A和B之间的辐射图 累加作用 累加作用 MIC MIC MIC MIC * 固体培养基上两种抗生素的相互作用 这是一种比较简单但不太准确的方法检测相互作用。 * 五、影响抗生素活性测定的因素 * 1．培养基组成 （1）在培养基组成中与抗生素的作用机制或其化学结构相关的因素，对抗生素活性影响较大。 * 抗生素活性测定的某些因素 * 2）与抗生素的作用机制或其化学结构不相关的因素，对不同抗生素的特异性差。 例如，营养丰富的培养基有利于细菌的快速生长，抗生素在其中的作用就比在营养贫瘠的培养基中的作用一般显得弱些。 在一定限度内，提高培养温度，有利于细菌快速生长，抗生素的作用同样也会受到影响。 * 3）培养基的pH值影响抗生素活性 培养基的pH值是影响抗生素活性的一个非常重要的因素。 A. 对微生物的生长产生影响。 B. pH值还会对物质透过细胞的能力产生直接的效应：一般情况下，非离子化的物质要比离子化的物质在透过细胞壁和细胞质膜时扩散更好。所以，培养基的pH值，通过影响碱性或酸性抗生素的离子化程度，直接影响着抗生素透入细胞的速度，从而影响抗生素的作用。 * 4）培养基中血清影响抗生素的活性 培养基中血清的存在，也会影响抗生素的活性。 许多抗生素能与血清蛋白(尤其是血清白蛋白)结合，因而减少了能自由活动进入细菌细胞内的抗生素分子数，而导致形成较高的MIC值。 * 5)试管的影响 对于那些活性很高的抗生素(MIC值在ng水平)，尤其是亲脂性的较多的抗生素分子被吸附到试管壁上，当试管为塑料制品时，所测活性会显得低于实际情况。 使用硅化试管可以防止这种现象的发生。 * ２．细菌接种物的密度和接种量 细菌接种物的密度，是指接种的细胞总数，除以最终测试体积所得的数值。一般以培养物中每毫升的活细胞数来表示。 接种量是指接种的所有细菌细胞的数目。 * 接种密度的影响 一般来说，接种密度在通常范围(103～l06细胞／毫升)内的波动，不会明显地影响MIC值。但是当接种密度很高时，会影响对测定抗生素测定。 （1）当接种密度很高时，即使在细菌细胞的外表面吸附了大量的抗生素分子，能够穿透进入细胞内的自由的抗生素分子数目便减少了许多，以至于不够抑制细菌生长。 （2）最重要的是，有些种类的细菌，产生并且破坏抗生素的酶(例如β－内酰胺酶能够灭活β－内酰胺类抗生素）。接种密度越高，酶的浓度越大，被酶破坏的抗生素的量越多。 （3）细菌群体中存在变异，而且变异程度与接种细菌总数目成正比。所有的敏感细胞将被抑制，但那些不太敏感的细胞会不断繁殖，就会产生高密度的细胞群。 * 跳管(skip) 当细菌对某一特异抗生素的抗性突变频率比较高时，如果接种量达到106个细菌或更多时，就会发现，在抗生素浓度高于MIC值的试管中，有时细菌仍能生长起来。这种现象称为跳管(skip)。 产生这种现象的原因是试管中随机产生了细菌抗性变株。 * 3．影响固体培养基中测定的特异因素 影响固体培养基中抗生素活性的测定因素： （1）一般因素(培养基组成、接种量)。 （2）有些特异因素： 1）琼脂 2）抗生素的物理化学性质 * 1）琼脂 A. 琼脂及琼脂中的亚硫酸根，多聚糖链会改变抗生素的扩散速率、培养基中的溶解氧和营养成分的扩散速率。 B. 琼脂中通常会有一定数量的二价阳离子。 因此，抗生素对某一细菌的MIC值，在液体培养基中测得数值与在固体培养基中测得的数值会不同，即使培养基成分完全相同，仅仅是琼脂不同。 * 2) 抗生素的物理化学特性 抑菌圈是由抗生素在琼脂培养基中的扩散速率决定的。抗生素的扩散速率与它的物理化学特性有关，一般与分子量成正比，也与它的分子形状、亲脂性及离子化特性有关。 采用扩散法测定抗生素的敏感性时，对所有的参数，即培养基组成、营养成分质量、接种菌密度、琼脂的厚度及浓度进行严格地标准化，显然十分重要。 * 第三节 抗生素浓度的测定方法 一、化学和非微生物学测定方法 二、微生物测定方法 * 一、化学和非微生物学测定方法 使用化学或物理化学方法，可以定量测定抗生素。这些方法的测定原理是基于抗生素的化学结构特性。 近年来，根据抗生素可见和紫外光的吸收特定以及与定量检测器(高效液相色谱)相联的色谱学方法得到了广泛的使用。 为了测定生物体液中的抗生素，最近引入了免疫学及酶学方法，如放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)。 抗原 或抗体 抗原 或抗体 底物 酶联免疫吸附法（ELISA）的原理 抗原 或抗体 96孔的聚苯乙烯塑料微孔板 酶标记抗体 或抗原 水解、氧化或还原 有色的底物 分光光度计进行测定 ＋ 酶标记抗体 或抗原 * 采用酶联免疫方法，可对牛奶、畜产品、水产品、饲料中抗生素残留进行批量快速检测。适用于各级政府检测机构、农牧渔等生产和加工企业、事业单