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微生物降解有机磷农药甲胺磷研究 　　[摘 要]对培养的华丽曲霉菌种降解甲胺磷的效果进行了研究，并对不同条件下的降解情况进行了讨论。实验结果表明，当甲胺磷浓度一定时，华丽曲霉菌种的用量在80 kg/hm2时降解的效果最好。当农药浓度在2．00-300mg/kg范围内，华丽曲霉菌均有明显的强降解作用。同时也对华丽曲霉菌种降解甲胺磷的代谢机制进行了推测。 　　[关键词]甲胺磷降解 　　有机磷农药(Organophosphates简称OPS)一直国内外广泛生产和使用的农药产品，其产品已达上百种。国内广泛使用的约有30种，其中80％以上是剧毒农药如甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷、敌敌畏等。甲胺磷是其中用量最大，用途广泛的一种水溶性的广谱杀虫、杀蜗剂。化学名称为：O，S－甲基胺基硫代磷酸酯。结构式见下图所示。该农药具有胃毒、触杀和内吸作用可用于防治水稻、棉花、玉米等作物的多种害虫。 　　 　　甲胺磷的结构式 　　尽管甲胺磷农药属非持久性农药，却由于其在我国使用而广、频繁量大，易在土壤、水体中短时间内积累，已超过一般微生物的净化能力，必然会对环境产生污染，对人、畜构成潜在的威胁，在某些环境条件下也会有较长的残存期并在动物体内产生蓄积作用。我国近10年来发生的农药中毒事故大多数集中于高毒有机磷农药，尤其是甲胺磷。因此，甲胺磷已成为我国优先检测的10种农药品种之一。 　　能分解甲胺磷的微生物系有细菌、放线菌、酵母、霉菌、藻类等，尤以细菌为多。许多科研工作者对此作了大量的研究，筛选出能够降解甲胺磷的一些菌种。从甲胺磷的结构来看，可能降解甲胺磷微生物有以下几种情况：①能以甲胺磷为唯一碳源和能源生长的矿化菌。由于甲胺磷为C1化合物，因此这类菌必为甲基营养菌。而矿化菌又可分为：(a)不能利用甲胺磷作唯一氮源；(b)能利用甲胺磷作唯一氮源；②不能利用甲胺磷为碳源和能源生长，但辅加其它可利用碳源后，可降解甲胺磷的共代谢菌其又可分为；(c)不能利用甲胺磷为碳、氮源；(d)能利用甲胺磷为唯一氮源。若某菌不能以甲胺磷为氮源生长，就意味着其无法打开p-N键。因此，必然不能单独降解甲胺磷为无机磷。所以，从有效彻底降解甲胺磷的角度考虑，无疑(b)、(d)两类菌比(a)、(c)两类菌更有潜在实际应用价值。 　　有研究表明甲胺磷在没有经过灭菌的土壤和水体中比在灭菌的有价值。甲胺磷在没有灭菌的土壤和水体中比在灭菌的土壤和水体中降解快；富含有机质的土壤中比在较贫瘩的土壤中降解快；在污浊的水体中比在相对清洁的水体中降解快。这些结果说明，微生物对在土壤和水体中的甲胺磷的降解起重要作用。 　　本文以优化培养的华丽曲霉菌种1作为研究对象，对甲胺磷在土壤中的降解情况进行研究。同时，通过实验对华丽曲霉菌种1分解甲胺磷的机理进行了推测。 　　 　　一、 实验材料、培养菌种以及分析方法 　　 　　1．实验材料： 　　华丽曲霉菌种，由中国农业大学提供。并在实验室中进行培养优化，得到华丽曲霉菌种1号，菌体密度约109，用于实验研究。培养基：牛肉蛋自胨培养基(g/L)，控制pH值在7．0左右，培养温度在35℃。实验农药为：50％的甲胺磷乳液(天津农药化工厂)。实验土壤：东北黑土(基本理化性能：粘土、有机质53．5g／kg、pH值8．4、CEC31．25mmol／kg)。 　　 　　 　　2．试验方法： 　　称取30．00g土壤(风干，过20目筛)于150 ml，三角烧瓶中。加入一定量的1000ug/mL甲胺磷乳液混匀。定量加入华丽曲霉菌种1菌剂。相当于菌浓度为2．5 x107／g(土壤)。补加一定量的蒸馏水，使其水份含量为土壤持水量的50％。混匀，盖上棉塞，置于35℃恒温培养箱中，定期取样测定土壤中甲胺磷含量。 　　 　　3．分析方法： 　　样品的前处理：取土样15g两份，一份用来测定土壤含水量，另一份作以下处理，将土样装入三角瓶中加50-60mL的丙酮和石油醚(1：：1)，混匀、静置过夜，然后振荡2h后过滤，用丙酮冲洗3次，滤液加2％-4％硫酸钠和石油醚后用分液漏斗分离，水层弃去。石油醚层用无水硫酸钠过滤，在旋转浓缩器中浓缩，定容至5mL，用于气相色谱测定。 　　 　　 　　4．实验仪器： 　　岛津GC-6A气相色谱仪，检测器FID，色谱柱2m OV－17+E－CA，柱温150℃，检测室温度250℃，汽化室温度250℃，载气流量：N250 mL/min,H260 mL/min，Air 60 mL／min，纸速8 mm／min，进样量2uL。该法回收率达90％，变异系数39％。 　　 　　二、结果与讨论 　　 　　1．不同华丽曲霉菌种用量处理的降解效果 　　从总体上看施用高效华丽曲霉菌种1号能有效地降低农药残留含量。在施用相同浓度的