《高三生物复习资料》实验2-分离尿素为氮源的微生物.pptVIP

配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 水 25mL 尿素溶液 10mL 配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml （2）倒平板 需要倒3个LB平板，9个尿素平板 接种 取0.1ml菌悬液 涂布分离 涂布分离 37℃倒置培养 * 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 土壤中的某些细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 红色 任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？ 利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 举一反三 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 …… 选择培养基 选择培养基 琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物 该培养基如何灭菌？ 尿素溶液用G6玻璃漏斗过滤，其他用高压蒸汽灭菌。 2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。 思考： LB培养基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组 选择培养基 实验组 3、请你提供一种方法，判断分解 尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。 思考： 方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基 中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若 指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。 二、实验目的: 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应) 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量 三、实验步骤 （1）制备细菌悬液 制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液 1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水 得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液 1g土壤 10-5 10-4 10-3 尿素 LB(对照) 每个稀释度 3个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组) 高浓度→低浓度，换枪头 低浓度→高浓度，可不用换枪头 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养 *