李志刚《微生物工程工艺与设》萃取分离技术及其设备-双水相.pptVIP

主要内容 双水相萃取工艺的发展背景 1 双水相萃取及其特点 2 4 双水相萃取的应用 双水相萃取的影响因素 3 溶剂萃取被寄予厚望， 双水相萃取工艺的发展背景 但传统萃取存在先天不足： 许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶剂 ； 蛋白质在有机溶剂相中易变性失活； 反胶束萃取效率不高，工艺复杂，普适性不高。 1896年，Beijerinck发现，当明胶与琼脂（或可溶性淀粉）溶液相混时，分为两相，上相富含明胶，下相富含琼脂(或淀粉)。 双水相萃取工艺的发展进程 1956年，瑞典伦德大学Albertsson 提及双水相萃取技术。 1979 年德国GBF 的Kula 等人以双水相萃取技术从发酵液 中提取各种酶。 国内自20世纪80 年代起也开展了双水相萃取技术研究。 双水相萃取及其特点 2 双水相萃取技术（Aqueous two-phase extraction) 传统双水相体系：当两种聚合物或一种聚合物与一种盐在水中以一定浓度混合时，可形成互不相溶的两相，其中一相富含一种聚合物，一相富含另一种聚合物或盐， 新型双水相体系：亲水性有机溶剂/盐 离子液体/盐 PEG ：聚已二醇 Kpi ： 磷酸钾 DX ： 葡聚糖 常用双水相系统 聚丙二醇 甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，葡聚糖 聚乙二醇 聚乙烯醇，葡聚糖，聚蔗糖 甲基纤维素 羟甲基葡聚糖，葡聚糖 乙基羟乙基纤维素 葡聚糖 羟丙基葡聚糖 葡聚糖 聚乙二醇 硫酸铵，硫酸钠，甲酸钠，酒石酸钾钠，磷酸钾 离子液体 硫酸铵，硫酸钠，碳酸钠，磷酸钾 乙醇，异丙醇 硫酸铵，硫酸钠，碳酸钠，磷酸钾 1）高聚物/高聚物双水相体系：由于高聚物之间的不相溶性，即高聚物分子的空间阻碍作用，相互无法渗透，不能形成均一相，从而具有分离倾向，在一定条件下即可分为二相。 2）亲水性溶剂/无机盐体系：其形成与盐的盐析作用紧密相关，即盐离子与亲水性溶剂争夺水分子形成缔合水合物，并最终和高聚物分离为两相。 双水相的形成 (1) 大量杂质能够与所有固体物质一起去掉,可将多个分离步骤整合为一,使整个分离过程更经济。 双水相萃取技术的特点 (2) 系统含水量高，两相界面张力极低(10 - 7～10 – 4 N·m - 1) ,有助于保持生物活性和强化相际间的质量传递； (3) 双水相分配技术易于连续化操作，容易放大，适合工业应用； (4) 目标产物的分配系数一般大于3 , 目标产物收率高； (5) 设备投资费用少,操作简单,不存在有机溶剂残留问题； (6) 影响因素复杂，可控方法较多。 双水相萃取技术的特点 双水相萃取的影响因素 3 双水相萃取影响因素 1)分配系数m CT 和CB 分别为上、下相酶浓度 2)m贡献因子 me、mb和ma分别为静电、疏水和亲 和作用对溶质m的贡献. 双水相萃取影响因素 4、分子大小 1、疏水作用 2、生物亲和作用 3、电化学分配 5、温度 1、疏水作用 i、疏水性按下列次序递增: 葡萄糖硫酸盐 甲基葡萄糖 葡萄糖 羟丙基葡聚糖 甲基纤维素 聚乙烯醇 聚乙二醇 聚丙三醇。 ii、同一聚合物的疏水性随分子量增加而增加。 2、生物亲和作用的贡献 (1) 酶—底物或抑制剂； (2) 抗原—抗体 (3) 激素—受体； (4) 糖蛋白—凝集素 (5) 生物素—生物素结合蛋白等 (6) 药物—载体蛋白 i、盐的种类及浓度 3、电化学分配 pH 升高, H2PO4- ? HPO42- ? PO43- 在PEG / K2HPO4 系统使带负电蛋白有较高的K。 盐的浓度很大时由于强烈的盐析，蛋白质的溶解度达到极限，表现分配系数增大，此时m与蛋白浓度有关。利用这一特点，通过调节ATPS盐浓度，可选择性萃取不同的酶。 ii、 pH 值的影响 改变两相的电位差 pH 值的变化也会导致组成体系与目标物的物 质电性发生变化，从而影响分配的进行。 如体系pH 值与蛋白质的等电点相差越大，则蛋白质在两相中分配越不均匀。 i、电中性蛋白质分子量 K随分子量增大而减小 4、分子量的影响 蛋白质富集 PEG DX PEG/DX系统 ii、降低DX分子量，则蛋白K减小 降低PEG的分子量，则蛋白K增大 聚合物的疏水性随分子