缝隙连接蛋白43类似物(Gap26)对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的保护作用及机制的分析-神经病学专业论文.docxVIP

Gap26对 Gap26对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的保护作用及机制的研究 中文摘要 结论：1、新生大鼠缺血缺氧后，脑组织Cx43含量明显增加，并且存在时间依赖性。说 明Cx43蛋白含量在新生大鼠缺血缺氧早期（24小时）及晚期（24小时后）的病理 生理学变化中均起到重要的作用。 2、使用Gap26干预新生大鼠HI模型，大鼠的脑梗死体积明显减小，远期神经行 为功能缺损明显减轻。这些均提示Gap26对新生大鼠脑缺血缺氧损伤具有神 经保护作用。 关键词：Gap26；脑缺血缺氧损伤；神经保护 IV 第二部分 Gap26对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的保护机制 目的：1、观察Gap26对新生大鼠缺血缺氧损伤后脑组织内凋亡相关蛋白caspase- 3表达、细胞外谷氨酸含量、星形胶质细胞的激活状态的影响； 2、研究Gap26对新生大鼠及元代星形胶质细胞缺氧损伤后Cx43的过量表达的 影响以及两者相互作用的相关分子机制。 方法：1、将出生7天的SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、假手术+Gap26（Sham+ Gap26）组、缺血缺氧（HI）组和缺血缺氧+ Gap26（HI+Gap26）组，建立HI模型，取缺血损伤侧脑组织为标本：采用Western blot法检测Cx43、GFAP、Cleaved Caspase- 3的表达；采用微透析方法提取新生大鼠活体脑组织细胞外液，利用高效液相色 谱法（HPLC）测定脑组织及其细胞外透析液中谷氨酸的含量；采用免疫共沉淀 法检测脑组织匀浆中的Cx43与生物素（biotin）标记的Gap26有无相互作用关系； 采用免疫荧光染色法观察各实验组脑组织冰冻切片星形胶质细胞的激活、Cx4 3的表达以及biotin-Gap26与Cx43定位关系。 2、将出生2天的SD大鼠取元代星形胶质细胞种板，随机分为对照(Con)组、对 照+Gap26（Con+Gap26）组、氧糖剥夺（OGD）组和氧糖剥夺+ Gap26（OGD+ Gap26）组，制作细胞氧糖剥夺（OGD）模型，观察缺氧前给予Gap26处理对星 形胶质细胞缺氧损伤的影响：通过Westwen blot法检测星形胶质细胞缺氧损伤后各实验组不同时间点不同处理方法下Cx 43、Akt、p- Akt的表达水平；利用交联剂BS3标记细胞膜表面蛋白；采用免疫荧光染色法观 察细胞爬片上星形胶质细胞biotin- Gap26与Cx43定位关系；采用MTT方法检测各实验组星形胶质细胞活力；采用 免疫共沉淀法检测各实验组泛素化Cx43的含量。 结果：1、Gap26明显降低脑缺血损伤后Cx43、GFAP和Cleaved Caspase- 3的过量表达（P0.05），减少缺血损伤侧脑组织及其细胞外液谷氨酸的含量（P 0.05）；荧光染色显示Gap26抑制HI组星形胶质细胞过度激活以及Cx43的过量表 V 达，Cx43与biotin- Gap26在脑组织有共定位关系；免疫共沉淀法检测脑组织匀浆中的Cx43与biotin -Gap26有相互作用关系，而作为对照组的biotin-P5则与Cx43没有相关性。 2、Cx43与biotin- Gap26在星形胶质细胞存在共定位关系；Gap26/Gap27明显降低Cx43的表达（P 0.05），同样可以减少小分子Cx43在OGD损伤后的过量表达，但对细胞膜表 面和胞浆的Cx43具有不同的作用；Gap26显著升高OGD损伤后p- Akt的表达以及泛素化Cx43的含量（P0.05），PI3K特异性抑制剂LY294002、 蛋白酶体抑制剂MG132以及溶酶体抑制剂氯喹均能在不同程度上抑制Cx43 的降解以及PI3K/Akt通路的激活，降低Gap26对细胞的保护作用，以LY29400 2、MG132作用为著（P0.05）；免疫共沉淀结果显示LY294002部分抑制了Cx43 结论：  的泛素化水平。 1、Gap26对新生大鼠缺血缺氧损伤的神经保护作用的机制与抑制细胞外毒性 水平的谷氨酸的释放、抑制星形胶质细胞的过度激活、抑制细胞凋亡有关。 2、Gap26主要通过泛素- 蛋白酶体途径降解缺血缺氧损伤后过度表达的Cx43，这种作用依赖于PI3K/ Akt通路的激活。 关键词：谷氨酸；细胞凋亡；星形胶质细胞；PI3K/Akt通路；泛素-蛋白酶体途径。 作 者：李晓静 指导老师：赵合庆 徐兴顺 VI Gap26对 Gap26对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的保护作用及机制的研究 英文摘要 The Neuroprotective Role of Gap26 on the cerebral hypoxia /ischemia injury in neonatal rats Abstract Part Ⅰ: Protective effects of Gap26 on the cereb