格列喹酮血药浓度测定及其分散片的人体生 物等效性研究-药剂学专业论文.docx

中 中 文 摘 要 PAGE 1万方数据 PAGE 1 万方数据 格列喹酮血药浓度测定及其分散片的人体生物等效性研究 摘 要 目的：格列喹酮(Gliquidone)是第二代磺酰脲类口服降血糖药。本课 题旨在建立健康人血浆中格列喹酮的液相色谱-质谱(LC - MS/MS)测定方 法，并进行格列喹酮片（糖适平）与格列喹酮分散片在中国健康受试者 体内的药代动力学和生物等效性研究。 方法：以北京万辉双鹤药业有限责任公司生产的格列喹酮片（糖适 平）做参比制剂，采用两制剂双周期随机交叉试验设计，研究格列喹酮 分散片的生物等效性。20 例健康男性受试者空腹口服单剂量格列喹酮受 试制剂或参比制剂 30 mg，于给药前和给药后 0-24 h 内按设计的时间点采 集血样。血浆样品中加入格列本脲为内标，采用沉淀蛋白法进行处理， 在 Capcell PAK MG C18（50×4.6 mm I.D.，5 μm）分析柱和 C18（4×3.0 mm I.D. ,5 μm）保护柱上进行分离，以乙腈-水-甲酸=67:33:0.1 为流动相，流 速为 0.80 ml/min；待测物采用串联四级杆质谱，在电喷雾电离源（ESI） 负离子模式下进行多反应监测（MRM），用于定量分析的离子反应分别 为 m/z 526.2??m/z 401.2（格列喹酮）和 m/z 492.1 ??m/z 367.1（格列本 脲），分析方法经充分验证后用于样品测定。所得血药浓度数据用 DAS 2.1.1 软件进行统计学分析，受试制剂和参比制剂的 Tmax 用 Wilcoxon 非 参数秩和检验进行统计学处理，Cmax 和 AUC 经对数转换后进行方差分析， 用双向单侧 t-检验和[1-2α]置信区间法进行生物等效性评价。 结果：在 5.00-1000 ng·ml-1 范围内，格列喹酮血浆浓度与峰面积具有 良好线性关系，定量下限为 5.00 ng·ml-1，典型回归方程为：Y =0.0365X- 0.00257(r = 0.9992，n = 7)。低、中、高 3 个浓度质控样品（格列喹酮血 浆浓度分别为 10.0，100 和 800 ng·ml-1）的日内 RSD 分别为 7.2%、3.8% 和 3.3%，日间 RSD 分别为 10.0%、7.0%和 9.5%，准确度分别为 97.5%、 99.9%和 100.4%，提取回收率分别为（73.5±5.0）%、（84.8%±2.3）%和 （81.7±4.4）%，内标的提取回收率为（93.2±6.0）%。格列喹酮低、高浓 度下的基质效应分别为 94.7%和 103.8%，相对标准差小于 7.5%，内标的 基质效应分别为 109.2%和 105.6%，相对标准差小于 4.2%。格列喹酮血 浆样品室温放置 6h、经历三次冻?融循环以及-70℃放置 56 天；均稳 定；处理后样品置自动进样器内放置 22 h 稳定。 按两制剂双周期交叉实验设计，19 名健康受试者口服 30 mg 格列喹 酮参比制剂或受试制剂，其主要药动学参数 Cmax 分别为(773.1±224.1) ng·ml-1 和(668.5±213.6)ng·ml-1；Tmax 分别为(3.3±1.6) h 和(3.1±1.0) h；AUC0-t 分别为(4853.0±1600.7) ng·ml-1·h 和(4428.8±1335.7) ng·ml-1·h；AUC0-∞分别 为(5501.9±1903.0) ng·ml-1·h 和(5227.6±2473.9) ng·ml-1·h；t1/2 分别为(8.9±7.2) h 和(11.9±25.1) h。Tmax 非参数秩和检验后结果显示：受试制剂与参比制剂 差异无统计学意义（P0.05）；Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后做方 差分析，受试制剂与参比制剂差异均无统计学意义（P0.05）。双向单侧 t 检验结果表明，格列喹酮受试制剂与参比制剂 AUC0-t 几何均值比的 90% 置信区间为 88.0%～96.0%，在 80%～125 %范围内；Cmax 几何均值比的 90%置信区间为 78.0%～94.4%，不在 80%～125%范围内；以 AUC0-t 计算， 受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(92.5±10.5) %。 结论：本文建立的血浆中格列喹酮的 LC-MS/MS 定量分析方法专属 性好，灵敏度高，精密准确，稳定可靠，适用于格列喹酮分散片在健康 人体中的药代动力学和生物等效性的研究。 根据 2015 年《中国药典》的生物等效性判断标准，本研究测定的受 试制剂格列喹酮分散片与参比制剂格列喹酮片（糖适平）生物不等效。 关键词：格列喹酮，分散片，LC-MS/MS，方法验证，生物等效性 英 英 文