低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的差异性调控作用-肿瘤学专业论文.docx

PAGE PAGE 10 PBS PMSF rpm RT-PCR phosophate buffered saline phenylmethyl sulfonylfluoride revolutions per minute reverse transcription polymerase 磷酸盐缓冲液 苯甲基磺酰氟化物 每分钟转数 逆转录聚合酶链反应 chain reaction SDS TBST Tris sodium dodecyl sulphate Tween-20/ Tris-buffered saline Tris-(hydroxymethyl) aminomethane 十二烷基硫酸钠 吐温20/Tris缓冲盐溶液 三羟甲基氨基甲烷 VEGF vascularendothelial growth factor 血管内皮生长因子 低氧对人肺腺癌细胞 SPCA-1 低氧诱导因子 HIF-1α 和 HIF-2α 的差异性调控作用 中文摘要 目的： 研究低氧是否可在人肺腺癌细胞SPCA-1诱导HIF-2α的基因表达，低氧对 HIF-2α的调控作用，低氧对HIF-2α和HIF-lα的调控差异及其原因。 方法： 体外培养人肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间， 采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加 入线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇来探讨低氧对 HIF-2α和HIF-lα蛋白的表达情况，探讨其表达调控的机理。 结果： （1）正常氧条件下，SPCA-1 整细胞提取物和细胞核提取物中，HIF-1α 表达量 几乎不表达，HIF-2α 在整细胞提取物中有少量表达，但在细胞核提取物中 无明显表达，当 SPCA-1 细胞经低氧(0.5% O2)处理 4h 后，HIF-2α 和 HIF-1α 蛋白均明显增多。 （2）常氧条件下细胞密度越低，HIF-2α 和 HIF-1α 蛋白均显著减少。当氧浓度 下降到 3%以下时，HIF-2α 和 HIF-1α 蛋白就有显著的增加。 （3）HIF-1α蛋白在低氧4h后增加，6h后含量显著降低，12h后降低至对照组0h 的水平。HIF-2α蛋白在低氧4h时增加，但在4～12h内无明显差异。HIF-2α 和HIF-1α mRNA在低氧4h后无明显变化。但随着低氧时间的延长，低氧可 明显改变HIF-1α和HIF-2α mRNA的表达， HIF-1α mRNA水平在低氧状态时 从6h到12h时显著降低，而H1F-2α mRNA水平则明显升高。 （4）SPCA-1细胞经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇 处理4h后，HIF-2α和HIF-lα蛋白含量明显降低。 结论 1. 低氧可在人肺腺癌细胞诱导HIF-1α和HIF-2α基因表达； 2. 翻译后修饰在低氧对HIF-1α和HIF-2α的诱导中发挥重要作用； 3. HIF-2α和HIF-1α mRNA的蛋白水平在细胞低氧适应反应的不同时段有所不同； 4. 低氧很可能是通过相同的信号通路发挥对HIF-2α和HIF-1α的诱导调控作用。 关键词： 低氧诱导因子-1α；低氧诱导因子-2α；人肺腺癌细胞；低氧；基因表达 Prolonged Hypoxia Differentially Regulates Hypoxia- inducible Factor (HIF)-1 and HIF-2 Expression in Lung Epithelial Cell Line SPCA-1 ABSTRACT Objective To study whether hypoxia could induce the expression of HIF-2α in lung epithelial cells SPCA-1，compare the characteristics of induction of HIF-2α by hypoxia with HIF-lα and investigate the underlying mechanisms． Methods Lung epithelial cells SPCA-1 cells were cultured in vitro under hypoxia or normoxia conditions, with different times, then we used RT-PCR and Western blot to determine the activation of HIF-2α and HIF-lα.An inhibitor of Mitochondrial reactive oxygen sp